Hlavnými metódami v etiologickej laboratórnej diagnostike mykóz stále zostávajú klasické metódy vrátane mikroskopie materiálu, izolácie čistej kultúry patogénu s jej následnou identifikáciou. Imunologické metódy diagnostika je druhoradá. Používajú sa na identifikáciu najvýznamnejších patogénov: patogénnych dimorfných húb, ako aj patogénov kryptokokózy, kandidózy a aspergilózy. Genoindikačné metódy (polymeráza reťazová reakcia) majú tiež obmedzené použitie kvôli ich nedostatočnej špecifickosti, ale používajú sa najmä pri diagnostike hlbokých a oportúnnych mykóz.
Materiálom pre výskum v laboratórnej diagnostike mykóz v závislosti od formy ochorenia môže byť: koža a jej prívesky (vlasy, nechty), výtok z rán a fistúl, spútum, krv, likvor a moč, vzorky z biopsie tkaniva . Správnosť odberu patologického materiálu do značnej miery určuje účinnosť ďalšieho laboratórneho výskumu. V prípade kožných lézií sa materiál pred ošetrením najčastejšie odoberá zoškrabaním alebo použitím lepiacej pásky (hlavne pri povrchových formách) z čerstvých, ale plne vyvinutých ložísk pozdĺž periférie, kde sa nachádzajú najživotaschopnejšie patogény.
Pri detekcii dermatofytových húb sú vlasy mimoriadne informatívnym materiálom, pretože povaha vlasovej lézie umožňuje identifikovať patogén. V niektorých prípadoch pomáha určiť léziu použitie Woodovej lampy. Postihnuté chĺpky spolu so šupinami sa odstránia epilačnou pinzetou. Pri chronickej čiernej bodkovanej trichofytóze sa vlasy odstránia z kože pitevnou ihlou.
Nechty sa vyberú vo všetkých vrstvách, odrežú sa ostrým skalpelom alebo nožnicami. Efektívnejší výber pomocou zubnej vŕtačky. Pri kandidových léziách sa materiál odoberá zoškrabaním z valčeka na nechty. Vybraný materiál sa do laboratória dodáva v tmavých papierových vrecúškach, aby sa zabránilo vysychaniu a kontaminácii cudzou mikroflórou. Materiál obsahujúci hnis sa dodáva v sterilných odtlačkoch alebo v Petriho miskách. Spútum sa zhromažďuje v sterilnej nádobe. Vyšetrenie spúta sa má vykonať najneskôr 2 hodiny po odbere. Pri predlžovaní času štúdie by sa vzorky mali uchovávať v chladničke pri teplote + 4 °C, inak môže dôjsť k diagnostickým chybám v dôsledku výskytu pseudomyceliálnych foriem kvasinkových buniek.
Krv a mozgovomiechový mok sa odoberajú v súlade s pravidlami asepsie. Krvné kultúry sa uskutočňujú v Sabouraudovom tekutom médiu. Aby sa vylúčila kontaminácia vzoriek krvi, vykonávajú sa ich opakované štúdie. cerebrospinálnej tekutiny odstredí a sediment sa použije na mikroskopiu a očkovanie.
Moč sa odoberá ráno v sterilnej miske, pričom je potrebné zabrániť kontaminácii materiálu mikroflórou kože perinea. Kultivácie moču sa uskutočňujú pomocou kvantitatívnych kultivačných metód.
Pri diagnostike mykóz sa používajú prípravky z natívneho materiálu aj farbené. Pri štúdiu nefarbených prípravkov sa hustý materiál vopred vyčistí (maceruje) 10-30% roztokom KOH (možno použiť roztoky dimetylsulfoxidu) a potom sa mikroskopuje metódou „drvenej kvapky“. Na dosiahnutie kontrastu sa prípravky farbia vodným roztokom metylénovej modrej.
Farbenie fixovaných náterov sa vykonáva rôznymi spôsobmi: podľa Grama, metylénová modrá, podľa Romanovského - Giemsa. Posledná metóda vám umožňuje vidieť malé kvasinkové bunky a štádiá fagocytózy. Na kryptokoky sa používa atramentová škvrna, Southgate škvrna s mucikarmínom. Napríklad huby obsahujúce melanín (tmavej farby). Cladophialophora bandana, farbené Massa - Fontana (farbenie melanínu, ktorý je súčasťou bunkovej steny). Fluorescenčné séra sa používajú pri diagnostike patogénov hlbokých mykóz, patogénov dermatofytóz, húb rodu Candida.
Izolácia čistej kultúry patogénu umožňuje určiť rod a druh huby, študovať jej vlastnosti a citlivosť na antimikrobiálne látky. Na izoláciu a identifikáciu húb sa používajú husté a tekuté živné pôdy Sabouraud, sladinový agar. Tieto médiá poskytujú rast väčšiny patogénnych a oportúnnych húb. Sabouraudovo médium (obr. 8.2) navyše stimuluje procesy tvorby pigmentu v hubách, čo je dôležité pre identifikáciu.
Na potlačenie rastu baktérií-kontaminantov sa do médií pridávajú antibiotiká: levomycetín, streptomycín, penicilín, tetracyklín. Na izoláciu náročných patogénnych húb sa používajú médiá obohatené o krv a extrakt zo srdca a mozgu. Na kultiváciu a identifikáciu húb sa používajú špeciálne médiá: Chapkovo médium - na tvorbu konídií pri identifikácii plesňových húb, zemiakový (zemiakovo-mrkvový) agar, ryžový agar - na identifikáciu rastových typov a získanie chlamydospór pri identifikácii húb rodu Candida, mrkvový (rastlinný) agar - na získanie typických kolónií kultúry huby Trichophyton schonleini, Kaškinovo médium - na izoláciu húb tvoriacich pigment. Diferenciálne diagnostické prostredia sa používajú napríklad aj na identifikáciu S. albicans- chromogénne médiá alebo médiá, umožňujúce určiť fosfolipázovú aktivitu huby.
Doba inkubácie húb sa pohybuje od niekoľkých dní do 1 mesiaca alebo viac. Ak existuje podozrenie na patogénne dimorfné huby, kultivácia sa vykonáva počas 8 týždňov, aby sa vyvolala negatívna odpoveď.
Očkovanie sa uskutočňuje na médiách naliatych do skúmaviek, fľaštičiek a Petriho misiek. Inokulácia materiálu pre dermatofytické huby sa vykonáva súčasne na niekoľkých skúmavkách s médiom. Materiály podozrivé z obsahu plesňových húb (spúta) sa naočkujú na 3 miestach a inkubujú sa pri 28 a 37 °C. Na vyriešenie problému neprítomnosti kontaminácie pri odbere vzoriek materiálu sa v laboratórnych priestoroch a na oddeleniach, kde sa nachádzajú pacienti, vykonávajú kontrolné zbery vzduchu na obsah plesňových húb.
Pri pestovaní húb v mykologickom laboratóriu sa dodržiavajú bezpečnostné opatrenia podobné tým v bakteriologických laboratóriách. Prácu s plesňami a mykotoxínmi, aby sa predišlo alergii, vykonáva personál v boxovaných miestnostiach v gázových obväzoch alebo v stolových boxoch s odsávačom pár. Práca s kultúrami patriacimi do skupiny patogenity II (patogénne dimorfné huby) je možná len v špecializovaných laboratóriách.
Identifikácia druhov húb sa uskutočňuje na základe komplexu kultúrnych, morfologických a iných znakov. Prvé zahŕňajú morfológiu kolónie, jej farbu a veľkosť pri kultivácii na špeciálnych médiách, štruktúru okraja a stredu, povahu povrchu, prítomnosť a povahu reprodukčných orgánov, druhé - vlastnosti mikroskopického stavba mycélia, stavba, tvar a veľkosť rozmnožovacích orgánov – konídiofóry, konídie, chlamydospóry, artrospóry a pod.
Formujú sa huby odlišné typy kolónie na pevných živných pôdach. Vedci z G. Venter Institute (USA), berúc do úvahy schopnosť húb uvoľňovať pigmentové látky do média, vytvorili v živnom médiu „vianočný stromček“ (obr. 8.3).
Ryža. 8.3. "Vianočný stromček" z húb (hore: Talaromyces stipitatus; drevo Aspergillus nidulans; dekorácie: Penicillium marneffei; peň: Aspergillus terreus)
Enzymatické a asimilačné schopnosti kultúr majú veľký význam pri identifikácii kvasiniek (kvasinkových húb). V súčasnosti sa na identifikáciu bežných húb, ktoré spôsobujú choroby u ľudí a zvierat, používajú komerčné testovacie systémy: BBL Mycotube, API 20С bio Merieux atď.
Základom diagnostiky plesňových ochorení je mikroskopické vyšetrenie preparátov pripravených z postihnutých oblastí kože a nechtov. Mikroskopický obraz pre rôzne typy mykóz je však podobný: v šupinách kože a nechtoch sú viditeľné spóry húb a rozvetvené septátové mycélium s priemerom 4-7 μm. Preto sa rod a druh huby vo väčšine prípadov nedá určiť mikroskopickým obrazom v šupke kože alebo zoškrabaním z nechtu. Na identifikáciu patogénu sa kultivácie uskutočňujú na živných pôdach, najčastejšie na Sabouraudovom médiu.
Epidermofytóza. Postihnutá je zrohovatená vrstva kože, najčastejšie chodidiel a nechtov dolných končatín. Vlasy nie sú nikdy ovplyvnené. Na nechtoch sa objavujú žlté škvrny alebo pruhy, potom vzniká hyperkeratóza (zhrubnutie nechtov), ich deformácia a deštrukcia. Lamelárne olupovanie chodidiel a interdigitálnych záhybov, začervenanie sa objavuje na koži nôh. Niekedy sa tvoria pľuzgiere, plienková vyrážka, praskliny. Choroba je sprevádzaná svrbením, pálením, bolestivosťou.
o mikroskopické vyšetrenieškrabance, šupiny, obaly pľuzgierov sú určené mierne presadenými vláknami mycélia s priemerom 3-5 mm, niektoré vlákna sa rozpadávajú na okrúhle a pravouhlé výtrusy.
Trichophytosis. Ide o plesňové ochorenie kože a jej prídavkov so zvláštnym sklonom k postihnutiu vlasov [lat. trichos vlasy + fytón huba]. Na pokožke hlavy sa objavujú početné lézie s priemerom asi 1,5 cm. Koža na nich je edematózna, hyperemická, pokrytá šupinami. Chĺpky v ohniskách sa odlamujú vo výške 2-3 mm nad povrchom kože, odtiaľ názov "lišajník".
Mikroskopické vyšetrenie odhalí výrazná vlastnosť huby druhu Trichophyton - usporiadanie ich spór do reťazcov. V závislosti od vlastností húb existujú:
Endothrix (pôvodca povrchovej trichofytózy). Huby rastú vo vnútri vlasov a dramaticky menia ich štruktúru. Celé vlasy sú vyplnené (vyplnené) paralelnými radmi reťazí pozostávajúcich z veľkých zaoblených alebo štvorcových spór;
Ectothrix (pôvodca hlbokej trichofytózy), pri ktorej sú vlasy zahalené do pošvy malých alebo veľkých spór usporiadaných pozdĺž osi do reťazí.
Favus – chrastavitosť. Postihnuté sú vlasy a pokožka, menej často nechty. Vlasy sú tenké, matné, "práškové", ako staré parochne, ale nelámu sa. Kožné lézie sú charakterizované výskytom žlto-sivých kôr (scutes) s vyvýšenými, tanierovitými okrajmi.
Mikroskopické vyšetrenie odhalí vzduchové bubliny vo vnútri postihnutých vlasov.
Microsporia. Postihnutá je pokožka a vlasy. V léziách sa vlasy odlamujú na úrovni 6-8 mm nad povrchom kože. Okolo zostávajúcich pňov sú viditeľné belavé kryty.
Mikroskopické vyšetrenie postihnutých vlasov ukazuje spóry, ktoré sa nachádzajú okolo a vo vnútri vlasov v mozaike (náhodne). Sú veľmi malé (1-3 mm), odtiaľ názov choroby. Diagnostike mikrosporie pomáha charakteristická luminiscenčná žiara vlasov.
Mikroskopické vyšetrenie odhalí zaoblené pučiace bunky, často vo forme strapca hrozna.
Hlboké (plesňové) mykózy.Častejšie ako choroby z povolania v závodoch na výrobu antibiotík, poľnohospodárski pracovníci v kontakte s plesnivým obilím, senom, kompostom atď. Pôvodca peniciliózy (hríb kefkový) má drsné, široké, septované mycélium, končiace kefou. Pôvodca slizníc má široké neseptické mycélium, končiace vrecúškom so spórami. Pôvodca aspergilózy (vyplavovanie plesní) sa často nachádza na plesnivom ovocí, chlebe. Má hrubé prepážkové mycélium, zakončené nástavcom, z ktorého vybiehajú nitky s výtrusmi, pripomínajúce napájadlo s prúdmi vody.
Aktinomykóza. Spôsobené rôznymi druhmi žiarivých húb. Je charakterizovaná tvorbou hustých infiltrátov na koži, slizniciach a vnútorných orgánoch, náchylných na hnisanie a fistuly. Vo výtoku fistúl sú viditeľné drobné žlté zrniečka s charakteristickým žiarivým okrajom – drúzy aktinomycét. Prípravky na mikroskopiu sa pripravujú z výtoku fistúl a spúta.
Drúzy žiarivej huby pri malom zväčšení vyzerajú ako žltkasté zaoblené útvary so svetlým amorfným stredom a tmavšou farbou po okrajoch. Pri veľkom zväčšení sa v strede drúz stanovujú vlákna mycélia a po obvode sa zväčšujú vydutia v tvare banky. Pri farbení podľa Grama sú vlákna mycélia G+ a čapíky sú G-.
4402 0
Žiaľ, už teraz možno konštatovať, že diagnostika plesňových ochorení je často včasná (zóny rednutia vlasov, lúpanie sa často mylne považujú za „lupiny“, „suchosť“). Zároveň sa v léziách často nevyskytujú subjektívne pocity (svrbenie, bolesť atď.) a kvôli tomu pacienti dlho nechodia k špecialistovi.
Zmeny na nechtoch (škaredé, lámavé, rednutie) sa po modrinách, omrzlinách a pod. považujú za onychodystrofiu. Zároveň (aj ojedinelé lézie vrátane nechtov) môžu viesť k vzniku alergickej reštrukturalizácie organizmu postihujú krvné a lymfatické cievy atď. Pacienti zároveň zostávajú na neurčitý čas zdrojom šírenia plesňovej infekcie. V súvislosti s vyššie uvedeným je vždy dôležitá včasná laboratórna diagnostika mykóz a možnosť včasnej liečby.
Rozmanitosť klinických variantov hubových chorôb, ktoré sa vyskytujú najmä u ľudí, ako aj vlastnosti mikrobiológie, morfoštruktúry, imunologických a iných parametrov rôznych druhov (a rodov) húb, viedli k existencii značného počtu metód diagnostiky. mykózy; Treba poznamenať, že dostupné metódy sa neustále zlepšujú a (pomerne nedávno) majú zvláštny sklon k imunologickým a molekulárno-genetickým testom.
Na druhej strane, kultúrne štúdie sú stále „v kategórii štandardov blízkych zlatu“ a používajú sa na potvrdenie pochybných výsledkov iných štúdií; existuje názor, že kombinácia kultúrnych a molekulárno-genetických metód v prípade „pochybných“ foriem mykóz v diagnostickom pláne (najmä diseminovaných, na pozadí imunosupresie akejkoľvek genézy, s léziami vnútorné orgány atď.) je jedným z najspoľahlivejších spôsobov registrácie mykotickej povahy procesu.
Netreba však zanedbávať „staré“ metódy, najmä bakterioskopiu (najmä pri vstupnom vyšetrení), najmä preto, že v každodennej praxi sa mikroskopické „overenie“ mykózy v mnohých dermatologických pracoviskách v porovnaní s inými testami najviac používa.
Vzhľadom na výrazný nárast počtu alergické prejavy na koži (a niekedy aj viscerálnej) - pri dlhom, chronickom, periodicky sa zhoršujúcom priebehu mykózy (koža, nechty atď.) je vhodné vykonať alergologické testy na zistenie stupňa senzibilizácie organizmu vrátane napr. kombinovaná hubovo-bakteriálna infekcia; táto skutočnosť môže ovplyvniť špecifiká liečby u konkrétneho pacienta – napríklad určiť racionálnu preskripciu antimykotík a desenzibilizátorov a pod.
Tradične predpokladaná diagnóza plesňové ochorenie na základe klinických prejavov a potvrdených laboratórnymi testami.
V tejto časti knihy stručne uvádzame základné metódy zaznamenávania mykóz (bez ohľadu na ich lokalizáciu) s prihliadnutím na „typ štúdie a odoberaný materiál“. Treba poznamenať, že polymorfizmus klinických prejavov mykóz (vrátane tých s alergickou zložkou) určuje rozmanitosť patologického materiálu, ktorý sa má študovať. V tomto prípade úspech hľadania prvkov huby závisí od jej správneho zachytenia.
Takže periférna zóna erytematózno-skvamóznych, často tvarovaných vyrážok je bohatšia na mycélium, spóry húb; na ochlpených miestach lézie sa odoberajú skrútené, belavé, odfarbené, matné vlasy alebo ich úlomky – „pahýly“ (odber vzoriek vlasov je vhodné kontrolovať Woodovou lampou). Určité zručnosti vyžadujú zber materiálu (pomocou ihly) z tzv. „čierne bodky“ – tmavé zrohovatené kužele pri ústí folikulov.
V každodennej praxi sa zvyčajne vyšetrujú kožné šupinky (zozbierané zoškrabaním, rozmazaním, pomocou lepiacej pásky), zoškrabaním zmenených nechtov, oblasť subungválnej hyperkeratózy a tiež oddeliteľné sliznice. Podľa indikácií sa vyšetruje spútum, výplachová tekutina, moč (u pacientov s nekatetrizovanými močového mechúra); moč z pisoárov, podstielky nemožno odobrať na výskum.
Diagnostickú hodnotu má aj krv (pre kultúrne štúdie, ako aj ELISA, PCR), cerebrospinálny mok a iné telesné tekutiny (pleurálne, intraartikulárne, intraperitoneálne – vrátane tých, ktoré sa odoberajú aspiráciou alebo drenážou); v niektorých prípadoch (v závislosti od aktuálnej diagnózy) sa vyskytuje žlč, výkaly, bodky podkožných abscesov, výtok z fistuly (najmä pri hlbokých mykózach). Dokonca aj jednoduché diagnostické testy vyžadujú presné dodržiavanie množstva podmienok.
V súčasnosti sa na diagnostiku plesňových ochorení používajú tieto metódy:
- mikroskopia; na základe detekcie patogénu v testovanom materiáli vr. v ľudských tkanivách;
- kultúrna štúdia, po ktorej nasleduje mikroskopické vyšetrenie kultúry huby;
- histologické vyšetrenie (napr. s hlbokými mykózami);
- imunitné a molekulárne metódy.
Mikroskopická diagnostika
Mikroskopická diagnostika bola možná s príchodom špeciálnych optických a neskôr aj elektrónových mikroskopických techník, ktoré umožnili detailne študovať ultraštruktúru húb. Diagnostický význam má v tomto prípade detekcia hubových elementov – tenkých rozvetvených nití, ktoré tvoria mycélium (mycélium), zaoblené telieska (spóry; sú rozmnožovacím „orgánom“ húb).Mikroskopická diagnostika zahŕňa štúdium nefarbených (natívnych) a zafarbených prípravkov. Táto metóda, ako bolo uvedené, je v dermatologickej praxi najrozšírenejšia pre svoju relatívnu jednoduchosť a nízku cenu, na druhej strane však nie je dostatočne citlivá, v niektorých prípadoch vyžaduje opakované analýzy, potvrdenie inými metódami.
Takže pri štúdiu nezafarbených prípravkov je možné okrem prvkov huby detegovať epiteliocyty, krvinky, rôzne kontaminanty z vonkajšie prostredie, čo sťažuje pátranie po pôvodcovi mykózy, si vyžaduje dodatočnú „prípravu“ materiálu – tzv. jej „presvetlenie“ (macerácia), zahustenie, zriedenie a pod.
Avšak priama mikroskopia natívne drogy umožňuje rýchlo diagnostikovať mykózu, určiť, ktoré živné médiá (v prípade potreby) by sa mali materiálom naočkovať, existuje názor, že jeho pozitívny výsledok môže zostať jediným laboratórnym potvrdením mykózy s negatívnou odozvou v kultúre (A.Yu. Sergeev Yu.V. Sergeev, 2003).
Spomedzi rôznych možností „osvietenia“ preparátov je najbežnejšie pridávanie KOH alebo NaOH do testovaného materiálu (častejšie sa používa na detekciu plesní v šupinkách kože, vo vlasoch, ale aj radu patogénov hlbokej mykózy v spúte bioptické vzorky).
Na maceráciu šupín rozdrvených a umiestnených na podložnom sklíčku sa použije 10-20% roztok hydroxidu sodného (alebo draslíka) - 1-3 kvapky počas 10-20 minút; prípravok sa zľahka zatlačí krycím sklom, pre rýchlejšie macerovanie sa zahrieva na plameni, kým sa neobjavia výpary. Prezeranie sa vykonáva najprv pri malom zväčšení, potom pri veľkom zväčšení (suchý systém).
Správne pripravený prípravok, ktorý nebol vystavený hrubým mechanickým, tepelným a chemickým vplyvom, predstavuje obraz homogénnej hmoty pozostávajúcej z epitelocytov, produktov bunkového rozpadu prvkov huby - mycéliových filamentov a spór.
Upravené vlasy sa umiestnia na sklíčko s 10-30% alkáliou a ošetrujú sa rovnakým spôsobom, ale dlhšie - od 20 minút do 3-4 hodín. S bohatým obsahom pigmentu sa odporúča vlasy odfarbiť 5% roztok peroxidu vodíka. Pripisujú dôležitosť detekcii hubových prvkov, ako aj ich umiestneniu vo vzťahu k vlasom.
Príprava materiálu z patologicky zmenených nechtov (najlepšie jemný prášok získaný zoškrabaním z hĺbky ohniska) prebieha podobne, avšak s použitím 30% hydroxidu sodného, povinného opatrného zahriatia na plameni na ľahké výpary a expozície cca 1 hod. (niekedy až niekoľko hodín). Prípravky ošetrené alkáliou by sa nemali skladovať dlhšie ako 1,5-2 hodiny z dôvodu ich „kazenia“ (kryštalizácia činidla, zníženie diagnostickej spoľahlivosti určenej mikroskopickým obrazom).
Namiesto KOH alebo NOOH môžete použiť: a) roztok zmesi KOH s 15 % DMSO; b) zmes fenolu (2 diely) s chloralhydrátom (2 diely) a kyselinou mliečnou (1 diel); c) calcofluor white, ktorý má afinitu k chiginu a celulóze; na štúdium je potrebný fluorescenčný mikroskop (pozoruje sa modrá alebo zelená žiara, ktorá závisí od použitého filtra). Pri štúdiu mozgovomiechového moku (ak existuje podozrenie na kryptokokózu) sa často používalo farbenie atramentom.
Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.
Choroby spôsobené plesňami alebo plesňovými infekciami sú častým problémom. Pôvodcov mykóz je neskutočné množstvo.
Vedci každoročne objavujú a popisujú nové druhy húb. Napriek tomu je diagnostika a liečba mykóz dlhodobo zabehnutým a jasným mechanizmom.
Druhy hubových chorôb
U ľudí väčšina húb postihuje sliznice a kožu.
Choroby, pri ktorých sú príčinou vývoja choroby huby, zahŕňajú:
- lišaj
- kandidóza
- onychomykóza
- pestrá alebo pityriasis, versicolor
- čierny lišajník
- seborea
- aspergilóza
Metódy diagnostiky mykóz
Jednou z najpopulárnejších metód je mikrobiologická diagnostika mykóz.
/IMG_7144_old.jpg)
Moderné diagnostické metódy umožňujú presne určiť, ktorá huba bola príčinou ochorenia. V budúcnosti to umožňuje zvoliť optimálny priebeh liečby. V súčasnosti existujú tri hlavné metódy laboratórnej diagnostiky mykóz.
Tie obsahujú:
- mikroskopické
- kultúrne
- sérologické
Každá z metód má svoje výhody. Kultúrna diagnostika mykóz umožňuje určiť typ húb. V tomto prípade je možné posúdiť citlivosť kolónií na rôzne lieky.
Táto metóda vám umožní vybrať si účinný liek. Táto metóda vyžaduje veľa času na siatie a pestovanie kolónií.
Mikroskopické a sérologické metódy na diagnostiku mykóz vyžadujú menej času na vykonanie. Pri ich použití sa určuje aj typ patogénu, ale nie je možné skontrolovať jeho citlivosť na lieky. V niektorých prípadoch je možné použiť aj luminiscenčnú diagnostickú metódu. Táto metóda je menej bežná kvôli jej zložitosti.
Luminiscenčná metóda sa môže použiť iba vtedy, ak sú vlasy napadnuté hubami. Metóda je neúčinná na diagnostiku skoré štádia. Je to spôsobené tým, že efekt žiary sa objaví len vtedy, keď sú vlasy silne poškodené plesňou.
Diagnóza mykózy nohy
Mykóza nohy je jednou z najčastejších dermatomykóz.
Tento termín sa bežne chápe ako plesňová infekcia kože nohy a nechtov.
Pamätajte! Ochorenie má recidivujúci priebeh.
Pri diagnostike mykózy chodidla je potrebné odlíšiť sa od množstva iných ochorení. Diagnóza mykózy nohy je založená na klinické prejavy a mikroskopické vyšetrenie. Je možné použiť kultúrnu metódu.
Liečba mykóz
Vedúcu úlohu v liečbe mykóz zohrávajú antimykotiká lokálneho a systémového účinku.
Liečba lokálnymi antimykotikami smeruje priamo do ohniska ochorenia. Zároveň je negatívny vplyv na telo ako celok minimálny.
Antimykotiká systémového účinku sa predpisujú, ak:
- lokálne antifungálne lieky sú neúčinné
- ochorenie je systémové
Pri sprevádzaní plesňových infekcií sú predpísané desenzibilizačné a antihistaminiká zápalový proces alebo alergické reakcie. Ak sa k mykózam pripojí sekundárna infekcia, je možné predpísať antibakteriálne lieky.
Liečbu plesňových ochorení je dôležité začať už v skorých štádiách ochorenia. Ak je proces starý, môže hojenie trvať dlhšie.
Keď sa objavia prvé príznaky, okamžite vyhľadajte pomoc od nášho lekára.
Presná diagnostika invazívnych mykóz neľahké. Je to spôsobené nielen ťažkosťami pri získavaní kultúry húb, ale aj pri interpretácii výsledkov štúdií, pretože huby, kvasinkové aj mycéliové, môžu kolonizovať sliznice a kontaminovať skúmané vzorky. V tomto smere je diagnostika invazívnych mykóz založená na integrovanom prístupe, ktorý zahŕňa nielen výsledky mykologických (kultúrnych) a sérologických (stanovenie hubového antigénu) štúdií, ale aj klinické príznaky plesňová infekcia, údaje z pomocných výskumných metód (počítačové alebo magnetické rezonančné zobrazovanie, ultrazvuk).
European American Cooperative Group na štúdium invazívnych mykóz u imunokompromitovaných pacientov boli vyvinuté kritériá na diagnostiku invazívnych mykóz. Boli prezentované v roku 2001 na Medzinárodnej konferencii o antimikrobiálnych látkach a chemoterapii (ICAAC, Chicago) a v roku 2002 v tlačenej podobe. Boli stanovené kritériá pre preukázanú, pravdepodobnú a možnú invazívnu mykózu, ktoré sa odporúčajú na použitie v klinických a epidemiologických štúdiách.
Overená invazívna mykóza spôsobená vláknitými hubami: detekcia mycélia húb v bioptických vzorkách alebo aspirátoch s histologickým príp cytologické vyšetrenie alebo izolácia kultúry zo vzoriek získaných za aseptických podmienok z normálne sterilnej lézie klinicky a rádiologicky spojenej s infekciou, s výnimkou analýzy moču a slizničných vyšetrení.
Dokázaná invazívna mykóza spôsobená kvasinkovými hubami: detekcia kvasinkových buniek (huby rodu Candida môžu vytvárať pseudomycélium alebo pravé mycélium) v bioptických vzorkách alebo aspirátoch, s výnimkou vzoriek zo slizníc, alebo izolácia kultúry zo vzoriek získaných za aseptických podmienok z normálne sterilného ohniska, ktoré podľa výsledkov klinických a rádiologických štúdií spojených s infekciou, s výnimkou vzoriek moču, sínusov a slizníc, alebo detekcia mikroskopicky a špecifické farbenie (v kvapke atramentu, farbenie mucikarmínom) kvasinkových buniek alebo pozitívny antigén Cryptococcus spp. v cerebrospinálnej tekutine.
Huba spôsobená vláknitými hubami: izolácia hemokultúry húb, s výnimkou Aspergillus spp. a Penicillium spp., vrátane Penicillium marneffei, v spojení s klinickými symptómami infekčný proces kompatibilný s izolovaným patogénom.
Huba spôsobená kvasinkovými hubami: izolácia krvnej kultúry húb rodu Candida alebo iných kvasinkových húb u pacientov s klinické príznaky infekcie spojené s týmto patogénom.
Súbor diagnostických štúdií pre invazívne mykózy
| Skúmaný biomateriál | Indikácie, použité médiá, hodnota |
| Krv |
Indikácie:
pretrvávajúca horúčka (4-5 dní alebo viac) na pozadí širokospektrálnej antibiotickej terapie; druhá "vlna" horúčky na pozadí antibiotickej terapie Odber krvi zo žily do liekoviek na aeróbne baktérie* alebo v selektívnom médiu pre huby, opakovane (2-3 krát počas dňa s intervalom 1 hodiny) Diagnostická hodnota: izolácia kvasinkových húb, starostlivá interpretácia pri izolácii vláknitých húb okrem Fusarium spp. |
| Venózny katéter |
Indikácie:
izolácia kvasiniek z krvi centrálne alebo periférne venózny katéter odstrániť vo všetkých prípadoch vylučovania kvasinkových húb z krvi Na mykologické vyšetrenie sa používa asepticky odstránený distálny segment katétra v dĺžke 5–6 cm. Diagnostická hodnota:
|
| Odnímateľný zvršok dýchacieho traktu, spútum, výtery z priedušnice, priedušiek, tekutina z bronchoalveolárnej laváže |
Indikácie:
podozrenie na mykózy spôsobené vláknitými hubami alebo Cryptococcus neoformans; dlhotrvajúca horúčka počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami a neutropénia Mikroskopia vzoriek s calcofluor white (detekcia mycélia alebo pseudomycélia); očkovanie na Sabouraudovo médium; stanovenie antigénu Aspergillus v tekutine z bronchoalveolárnej laváže v prítomnosti ložísk v pľúcach, charakteristických pre invazívnu aspergilózu Diagnostická hodnota: izolácia vláknitých húb alebo Cryptococcus neoformans |
| Cerebrospinálna tekutina |
Indikácie:
príznaky meningitídy; detekcia ohniska (ohniská) v mozgu pomocou počítačového alebo magnetického rezonančného zobrazovania; "Cerebrálne" príznaky na pozadí horúčky a neutropénie Mikroskopia s bielym kalkofluorom v kvapke atramentu; stanovenie antigénu Aspergillus, Cryptococcus; očkovanie na Sabouraudovo médium Diagnostická hodnota:
|
| Biopsie, aspiráty, peritoneálna tekutina, pleurálna tekutina |
Indikácie:
klinické a/alebo rádiologické príznaky invazívnej mykózy; horúčka počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami. Mikroskopia s bielym kalkofluorom, očkovanie na Sabouraudovo médium Diagnostická hodnota:
|
Pravdepodobná invazívna mykóza diagnostikovaná kombináciou nasledujúcich kritérií:
jeden znak z kategórie mikrobiologických kritérií;
jeden príznak z kategórie „významných“ alebo dva zo skupiny „menej významných“ klinických príznakov infekčného procesu.
Možná invazívna mykóza diagnostikovaná na základe kombinácie nasledujúcich kritérií:
prítomnosť aspoň jedného rizikového faktora vyvolávajúceho rozvoj invazívnej mykózy;
jeden znak z kategórie mikrobiologických kritérií alebo jeden znak z kategórie „významné“ (dva zo skupiny „menej významné“) klinické príznaky infekčného procesu.
Koncept " možná invazívna mykóza» sa neodporúča používať v klinických štúdiách skúmajúcich účinnosť antimykotík. Tento termín môžete použiť pri analýze empirickej antimykotickej liečby, epidemiologických štúdiách, štúdiu farmakoekonomiky.
o mykologický výskum sterilné aspiráty alebo bioptické vzorky zohľadňujú nielen izoláciu kultúry húb, ale aj dôkaz mycélia alebo pseudomycélia mikroskopicky. V histologických preparátoch je Aspergillus ťažké odlíšiť od Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum a niektorých iných vláknitých húb. Pre odlišná diagnóza mala by sa vykonať imunohistochemická štúdia s protilátkami proti Aspergillus.
Izolácia kvasinkových húb z krvi v aspoň jednej štúdii patrí do kategórie "overených" invazívnych mykóz a je absolútnou indikáciou na vymenovanie systémových antimykotík u pacientov s neutropéniou. Frekvencia detekcie kvasinkových húb z krvi je nízka, dokonca aj pri diseminovanej kandidóze je 35-50%.
Holding opakované hemokultúry zvyšuje pravdepodobnosť pozitívnych výsledkov.
Iné výklad výsledky v prípade zistenia vláknitých húb v krvi. Vysoká frekvencia izolácie vláknitých húb je charakteristická pre Fusarium spp. a je 40-60%. Aspergillus sa vyskytuje veľmi zriedkavo, vo väčšine prípadov je považovaný za kontamináciu, s výnimkou Aspergillus terreus.
Výber Aspergillus terreus z krvi pacientov s hemoblastózami môže naznačovať skutočnú aspergilémiu a v prítomnosti klinických príznakov infekcie je základom pre predpisovanie antimykotík.
Kritériá pre invazívnu mykózu
| Index | Kritériá |
| Faktory vyvolávajúce výskyt invazívnej mykózy (makroorganizmus) | neutropénia (< 0,5*109/л в течение 10 дней)
Pretrvávajúca horúčka viac ako 96 hodín na širokospektrálnych antibiotikách Telesná teplota nad 38 °C alebo pod 36 °C a ktorýkoľvek z nasledujúcich predisponujúcich príznakov: predĺžená neutropénia (viac ako 10 dní) v predchádzajúcich 60 dňoch, intenzívna imunosupresívna liečba v posledných 30 dňoch, preukázaná alebo pravdepodobná invazívna mykóza v predchádzajúcich periódová neutropénia alebo AIDS Prítomnosť symptómov GVHD, najmä prípady ťažkého priebehu (stupeň II) alebo rozsiahly priebeh chronického ochorenia Dlhodobé (viac ako 3 týždne) užívanie glukokortikoidov počas posledných 60 dní |
| Mikrobiologické príznaky | Izolácia kultúry vláknitých húb (vrátane Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. a Zygomycetes) a Cryptococcus neqformans zo spúta alebo tekutiny z bronchoalveolárnej laváže Pozitívne výsledky kultivačného alebo cytologického vyšetrenia (priama mikroskopia) na detekciu vláknitých húb z aspirátov vedľajších nosových dutín Detekcia vláknitých húb alebo Cryptococcus neoformans na cytológii/priamej mikroskopii zo spúta alebo tekutiny z bronchoalveolárnej laváže Pozitívny antigén Aspergillus vo vzorkách bronchoalveolárnej laváže, cerebrospinálnej tekutiny a krvi (najmenej dvoch) Pozitívny kryptokokový antigén vo vzorkách krvi Cytologickou alebo priamou mikroskopiou detekcia hubových elementov vo vzorkách normálne sterilných tekutín (napr. Cryptococcus spp. v cerebrospinálnej tekutine) Dva pozitívne výsledky testov na zistenie kultúry kvasiniek v moči pri absencii močového katétra Kryštály Candidy v moči bez močového katétra Izolácia Candida spp. z krvných kultúr |
|
Klinické príznaky
dolných dýchacích ciest |
Musí byť spojené s miestom, z ktorého sa odoberajú vzorky na mikrobiologické vyšetrenie Ktorýkoľvek z nasledujúcich typov nových pľúcnych infiltrátov na CT: znak halo, znak polmesiaca, dutina s oblasťami konsolidácie* Príznaky infekcie dolných dýchacích ciest (kašeľ, bolesť na hrudníku) hrudník, hemoptýza, dýchavičnosť), trenie pleury, akýkoľvek nový infiltrát, ktorý nie je zahrnutý medzi príznaky vysokej závažnosti; pleurálny výpotok |
| horné dýchacie cesty Znaky s vysokým významom Známky menšieho významu |
Rádiologické príznaky invazívnej infekcie v dutinách nosa (erózia steny alebo šírenie infekcie do priľahlých štruktúr, rozsiahla deštrukcia kostí lebky) Výtok z nosa, upchatý nos, ulcerácia nosovej sliznice, krvácanie z nosa periorbitálny edém, maxilárna bolesť, čierna nekrotická ulcerácia alebo perforácia tvrdého podnebia |
| centrálny nervový systém Znaky s vysokým významom Známky menšieho významu |
Röntgenový dôkaz suspektnej infekcie CNS (mastoiditída alebo iné parameningeálne ložisko, extradurálny empyém, mnohopočetné lézie v substancii mozgu alebo miechy) fokálne neurologické symptómy a znaky, vrátane fokálnych záchvatov, hemiparézy; poruchy vedomia, meningeálne symptómy, porušenie biochemického zloženia cerebrospinálnej tekutiny a jej bunkového zloženia (v neprítomnosti iných patogénov, podľa kultivácie a mikroskopie, v neprítomnosti nádorových buniek) |
o detekcia v krvi alebo iných sterilných biosubstrátov kvasinkových húb je potrebné vykonať identifikáciu k druhu a určiť citlivosť na antimykotiká, pri izolácii vláknitých (plesňových) húb - iba identifikácia na druh, citlivosť sa nestanovuje.
V klinickom prax citlivosť vláknitých húb sa neskúma pre nedokonalosť noriem na stanovenie citlivosti takýchto húb na antimykotiká. Okrem toho iba jedna štúdia preukázala koreláciu medzi Aspergillus spp. a výsledky liečby invazívnej aspergilózy u pacientov s hemoblastózami. Žiadna z nasledujúcich štúdií nepriniesla podobné výsledky.
Nedávno sa začali objavovať ojedinelé správy o vzniku získanej rezistencie húb A. fumigatus na itrakonazol, vorikonazol.
Identifikácia húb podľa druhov, najmä získaný zo sterilných lokusov, je nevyhnutný predovšetkým pre výber antimykotickej a adekvátnej antimykotickej terapie. Candida krusei sú teda rezistentné na flukonazol a menej citlivé ako iné druhy kvasiniek na amfotericín B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. odolný voči amfotericínu B; Mucorales sú rezistentné na itrakonazol, vorikonazol, Candida glabrata vykazuje citlivosť na flukonazol závislú od dávky a ak sa tento typ plesne, dokonca aj citlivé kmene, izoluje, treba zvýšiť dávku flukonazolu (dospelým sa predpisuje 800 mg namiesto 400 mg) ; Candida lusitaniae sú odolné voči amfotericínu B.
Identifikácia húb podľa druhov je dôležitý aj pre epidemiologický rozbor v nemocnici – určenie pôvodcov prepuknutia nákazy a ak je to možné, zdroj nákazy. Opisujú sa ohniská infekcie spôsobené takými vzácnymi hubami ako C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.
Na základe druhová identifikácia húb možno predpokladať invazívnu mykózu alebo plesňové osídlenie slizníc. Napríklad Aspergillus niger je výrazne menej pravdepodobné, že spôsobí invazívnu aspergilózu u pacientov ako Aspergillus fumigatus. akútna leukémia. Izolácia Aspergillus niger z tekutiny z bronchoalveolárnej laváže sa najčastejšie považuje za kolonizáciu dýchacieho traktu a zo spúta - za kontamináciu zo vzduchu a vyžaduje si ďalšie štúdie na potvrdenie diagnózy invazívnej aspergilózy.
Na základe izolácia vláknitých húb zo spúta, bronchoalveolárnej tekutiny, aspirátu z vedľajších nosových dutín možno invazívnu mykózu len predpokladať, nerátajúc ju do kategórie „overené“. Vždy je však potrebné vziať do úvahy detekciu Aspergillus v spúte, najmä Aspergillus fumigatus alebo Aspergillus flavus, u pacientov s neutropéniou, ktorí dostávajú alogénnu kostnú dreň. Vyžaduje to opätovné držanie mykologický výskum a Počítačová tomografia pľúca. Takže s neutropéniou je pravdepodobnosť detekcie invazívnej aspergilózy v prípade pozitívnej kultúry Aspergillus spp. v spúte je 80 %.
Výber Cryptococcus neoformans u imunokompromitovaných pacientov z dýchacích ciest (výplachy, výplachy) je diagnosticky významný. Ak identifikácia kvasinkových húb z tekutín získaných z dýchacích ciest (výplachy z priedušnice, priedušiek, bronchoalveolárna laváž) imunokompromitovaných pacientov nie je povinná, potom je nevyhnutný skríning na detekciu Cryptococcus neoformans z týchto vzoriek.
Detekcia kandidy v moči u pacientov s neutropéniou a horúčkou sa zvyčajne považuje za prejav diseminovanej kandidálnej infekcie.
Včas diagnostika invazívne úspešne použiť komerčný test na zistenie cirkulácie špecifického antigénu húb Aspergillus spp. galaktoman (polysacharid vo vode rozpustný komponent bunkovej steny huby).
Galactomann možno stanoviť dvoma metódami: metódou latexovej aglutinácie (Pastorex Aspergillus, BioRAD) a metódou enzýmový imunotest(Platelia Aspergillus, BioRAD).
výhodu enzýmový imunotest je nižší prah citlivosti na stanovenie hladiny galaktomanu v krvi - 1 ng / ml alebo menej a pomocou latexovej aglutinácie - 15 ng / ml. Diagnostická hodnota je stanovenie galaktomanu v krvi (najmenej 2 vzorky), likvore, bronchoalveolárnej laváže. Senzitivita metódy enzýmovej imunoanalýzy je asi 90 %, špecificita 90 – 99 %, u alogénnych príjemcov kostnej drene sú tieto hodnoty nižšie a rovnajú sa 60 – 70 % a 80 – 90 %, v dôsledku profylaktického použitia antifungálne lieky(antimykotiká znižujú prahovú hladinu galaktomanu).
V 40% prípadov detekcia galaktoman v krvi pred prejavmi invazívnej aspergilózy, zistenými počítačovým vyšetrením pľúc a v 70 % pred klinickými príznakmi infekcie.
Diagnostická hodnota testu detekcie antigénu Aspergillus má v prípade, že sa štúdia vykonáva opakovane. Stanovenie antigénu Aspergillus v krvi by sa malo vykonávať s horúčkou počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami u pacientov s neutropéniou 2-krát týždenne; s pneumóniou, ktorá sa vyskytuje alebo pretrváva na pozadí antibiotická terapia; pri detekcii ohniskov v pľúcnom tkanive (počítačová tomografia).
