5. „REAKCIA SENZORA-MOTOR. MOTORICKÁ REAKCIA BOXERA NA VZHĽAD VONKAJŠIEHO DRÁŽDIVA V rýchlostnom prevedení úderu hrá dôležitú úlohu to, ako boxer reaguje na objavenie sa vonkajšieho podnetu (zvuk, signál, žiarovka na dynamometri pred

Reakcia inhibície hemaglutinácie

serol. reakcie založené na inhibícii aglutinácie erytrocytov. Aplikujte 2 typy G. t. r: reakciu inhibície aktívnej (RTGA) a pasívnej (RTPGA) hemaglutinácie. RTGA používa sa na sérodiagnostiku vírusových infekcií a typizáciu neznámych vírusov. V prvom variante sa k sérii dvojitých riedení s-to-b-nogo, ktoré sa odoberajú na začiatku ochorenia a o 10-14 dní neskôr, pridá 0,25 ml štandardného vírusového diagnostika v objeme 0,25 ml. Po hodinovej expozícii pri teplote miestnosti sa do každej skúmavky (jamka) pridá 0,5 ml 1 % suspenzie kuracích erytrocytov. Po 30 - 60 minútach v oboch radoch sa stanovia posledné riedenia s-to, pri ktorých je zaznamenaná inhibícia (absencia) hemaglutinácie. V prípade zvýšenia titra protilátok 4-krát alebo viac dávajú pozitívnu odpoveď, v iných prípadoch - negatívnu. Na typizáciu vírusu sa pripraví séria dvojnásobných riedení vzorky štandardného typu v objeme 0,25 ml, do každého riedenia sa pridá rovnaký objem štúdie. vírusová suspenzia s aktivitou 4 hemaglutinačných jednotiek. (dávky), inkubované pri teplote miestnosti počas 1 hodiny a doplnené 0,5 ml 1 % suspenzie kuracích erytrocytov. Účtovanie sa vykonáva rovnakým spôsobom ako v predchádzajúcej verzii. Vírus sa rozpozná ako identický s s-ke, ak RTGA dosiahne titer alebo 1/2 titra štandardného s-ki. Okrem tejto a ďalších možností sa vkladajú 3 kontroly: s-ki, vírus, erytrocyty. RTPGA sa zvyčajne vykonáva na detekciu bakteriálneho, hubového, protozoálneho Ag (hapténov) v štúdii. materiál. Je vysoko citlivý, špecifický, no nastavenie je časovo náročné. RTPGA sa tiež vykonáva v 2 stupňoch. V 1. štádiu k sérii dvojnásobných riedení štúdie. k Ag materiálu sa pridá rovnaký (zvyčajne 0,25 ml) objem štandardného imunitného s-ki, odobratého v pracovnej dávke. Skúmavky sa uchovávajú v termostate po dobu 2 hodín.V prítomnosti zodpovedajúceho Ag v materiáli dochádza k väzbe Ab a s následným pridaním erytrocytového diagnostika v množstve skúmaviek (a v závislosti od množstva Ag), je inhibovaná aglutinácia senzibilizovaných erytrocytov. Skúsenosti sprevádzajú kontroly s-ki, erytrocyty a materiál.

(Zdroj: Slovník pojmov z mikrobiológie)

Pozrite sa, čo je "Hemaglutinačná inhibičná reakcia" v iných slovníkoch:

hemaglutinačná inhibičná reakcia- Laboratórium RTGA, sérologická metóda. [Anglicko-ruský slovník základných pojmov z vakcinológie a imunizácie. Svetová zdravotnícka organizácia, 2009] Témy vakcinológia, imunizácia Synonymá RTGA EN inhibícia hemaglutinácie… … Technická príručka prekladateľa

- (RTGA) metóda identifikácie vírusu alebo detekcie antivírusových protilátok v krvnom sére pacienta, založená na fenoméne neprítomnosti aglutinácie erytrocytov liekom obsahujúcim vírus v prítomnosti krvného séra imunitného voči nemu ... Veľký lekársky slovník

RTGA

RTG- hemaglutinačná inhibičná reakcia Slovník skratiek ruského jazyka

- (lat. infectio infekcia) skupina ochorení, ktoré sú spôsobené špecifickými patogénmi, vyznačujúce sa nákazlivosťou, cyklickým priebehom a tvorbou postinfekčnej imunity. Termín " infekčné choroby"bol predstavený ... ... Lekárska encyklopédia

Táto stránka je glosár. # A ... Wikipedia

Hlavné skratky akceptované vo veterinárnom encyklopedickom slovníku- a., aa, artena, arteriae aa ana (rovnako) Akadémia lekárskych vied ZSSR Akadémia lekárskych vied ZSSR Akadémia vied ZSSR Akadémia vied ZSSR Bac. baktérie bacil. Bacterium BSSR Bieloruská SSR c., c. storočie, storočie v., v. vena, venae VASKHNIL Celoúniový rád Lenina a ... ... Veterinárny encyklopedický slovník

Ag antigén AE antitoxická alebo antigénna antibakteriálna jednotka. antibakteriálny At protilátka ATP adenozín trifosforečná kyselina baktéria. bakteriálny bakteriologický bakteriologický bakterioskop. bakterioskopická baktericídna aktivita ALS ... ... Mikrobiologický slovník

- (z lat. sérum sérum a ... Logia) doslova náuka o vlastnostiach krvného séra; zvyčajne pod S. rozumieme oblasť imunológie, ktorá študuje interakciu protilátok (Pozri Protilátky) séra s antigénmi (Pozri Antigény). Sérologické reakcie ... ... Veľká sovietska encyklopédia

Mnohé vírusy majú schopnosť aglutinovať erytrocyty presne definovaných druhov cicavcov a vtákov. Vírusy chrípky a mumpsu teda aglutinujú erytrocyty kurčiat, morčiat a ľudí a adenovírusy aglutinujú erytrocyty potkanov a myší. V tomto ohľade na ich detekciu v materiáli pacientov alebo bunkových kultúr, embryí a zvierat, dali hemaglutinačná reakcia(RGA). Na tento účel sa v jamkách tabliet pripravia dvojnásobne sa zvyšujúce riedenia materiálov a kvapalín obsahujúcich vírus a pridajú sa k nim suspenzie erytrocytov premyté izotonickým roztokom NaCl. Na kontrolu spontánnej aglutinácie sa erytrocyty zmiešajú s rovnakým objemom izotonického roztoku NaCl. Zmesi sa inkubujú v termostate pri teplote 37 °C alebo pri teplote miestnosti.

Výsledky RHA sú zohľadnené charakterom aglutinácie erytrocytov po 30-60 minútach, kedy sú zvyčajne úplne vyzrážané v kontrole. Pozitívna reakcia je označená plusmi. „++++“ je sediment v tvare dáždnika, „+++“ je sediment s medzerami, „++“ je sediment s veľkými medzerami, „+“ je flokulentný sediment obklopený zónou zhluknutých erytrocytov, a „–“ – ten istý ostro ohraničený sediment erytrocytov vo forme „gombíka“ ako pri kontrole

Keďže RGA je špecifická pre skupinu, neumožňuje určiť druhy vírusov. Sú stotožnení s hemaglutinačné inhibičné reakcie(RTGA). Na jeho nastavenie sa používajú známe imunitné antivírusové séra, ktoré sa zriedia v izotonickom roztoku chloridu sodného v dvojnásobne klesajúcej koncentrácii a nalejú do jamiek. Do každého riedenia sa pridá rovnaké množstvo tekutiny obsahujúcej vírus. Kontrolou je suspenzia vírusu v izotonickom roztoku chloridu sodného. Doštičky so zmesou séra a vírusu sa uchovávajú v termostate počas 30 minút alebo pri teplote miestnosti počas 2 hodín, potom sa do každej z nich pridá suspenzia erytrocytov. Po 30 minútach sa stanoví titer neutralizačného séra (t.j. jeho maximálne zriedenie), čo spôsobilo oneskorenie aglutinácie erytrocytov.

RTGA sa používa pri sérologickej diagnostike vírusových ochorení, najmä chrípky a adenovírusové infekcie. Je lepšie to dať rovnakým spôsobom ako pH, s párovými sérami. Štvornásobné zvýšenie titra protilátok v druhom sére potvrdzuje predpokladanú diagnózu.

5 Reakcia neutralizácie vírusu. Táto reakcia sa používa na identifikáciu vírusov. Na tento účel sa k testovanému materiálu obsahujúcemu neznámy vírus pridá špecifické antivírusové sérum. Po inkubácii sa táto zmes vstrekne buď do kuracieho embrya, alebo do laboratórneho zvieraťa, alebo do bunkovej kultúry. Najčastejšou reakciou je neutralizácia vírusov v bunkovej kultúre. Tu sa do kultivačného média pridáva indikátor. Ak sa protilátky zhodujú s vírusom (neutralizujú ho), potom sa bunková kultúra vyvíja normálne. V tomto prípade sa uvoľňujú kyslé produkty bunkového metabolizmu, pH média sa znižuje a indikátor mení svoju farbu. Pri kontrole vírus rýchlo ničí bunkovú kultúru, pH sa nemení a farba média zostáva rovnaká.

Hemaglutinačný inhibičný test (HITA) je metóda na identifikáciu vírusu alebo detekciu antivírusových protilátok v krvnom sére pacienta, založená na fenoméne neprítomnosti aglutinácie erytrocytov liekom obsahujúcim vírus v prítomnosti krvného séra, ktoré je voči nemu imúnne.

Hemaglutinačná inhibičná reakcia (RTHA) je založená na blokáde, potlačení antigénov vírusov protilátkami imunitného séra, v dôsledku čoho vírusy strácajú schopnosť aglutinovať červené krvinky.

RTHA sa používa na diagnostiku mnohých vírusových ochorení, ktorých pôvodcovia (chrípka, osýpky, rubeola, kliešťová encefalitída atď.) môžu aglutinovať erytrocyty rôznych zvierat.

Mechanizmus. Typizácia vírusu sa vykonáva v teste inhibície hemaglutinácie (HITA) so sadou typovo špecifických sér. Výsledky reakcie sa berú do úvahy absenciou hemaglutinácie.

Subtypy vírusu A s antigénmi H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 atď. možno v RTGA rozlíšiť pomocou súboru homologických typovo špecifických sér.

Reakcia väzby komplementu. Mechanizmus. Komponenty. Aplikácia

Reakcia fixácie komplementu (RCC) spočíva v tom, že pri vzájomnej korešpondencii antigénov a protilátok vytvoria imunitný komplex, na ktorý je prostredníctvom Fc fragmentu protilátok naviazaný komplement (C), t.j. komplement je naviazaný antigénom. - komplex protilátok. Ak sa nevytvorí komplex antigén-protilátka, komplement zostáva voľný.

Špecifická interakcia AG a AT je sprevádzaná adsorpciou (väzbou) komplementu. Keďže proces fixácie komplementu nie je viditeľný vizuálne, J. Bordet a O. Zhangu navrhli použiť hemolytický systém (ovčie erytrocyty + hemolytické sérum) ako indikátor, ktorý ukazuje, či je komplement fixovaný komplexom AG-AT. Ak si AG a AT navzájom zodpovedajú, teda vznikol imunitný komplex, potom sa komplement naviaže na tento komplex a nedochádza k hemolýze. Ak AT nezodpovedá AG, potom sa komplex nevytvorí a komplement, ktorý zostane voľný, sa spojí s druhým systémom a spôsobí hemolýzu.

Komponenty. Komplement fixačný test (RCC) je komplexný sérologický test. Na jeho realizáciu je potrebných 5 zložiek, a to: AG, AT a komplement (prvý systém), ovčie erytrocyty a hemolytické sérum (druhý systém).

Antigénom pre CSC môžu byť kultúry rôznych usmrtených mikroorganizmov, ich lyzáty, zložky baktérií, patologicky zmenené a normálne orgány, tkanivové lipidy, vírusy a materiály obsahujúce vírusy.

Ako doplnok sa používa čerstvé alebo suché sérum pre morčatá.

Mechanizmus. RSK sa uskutočňuje v dvoch fázach: 1. fáza - inkubácia zmesi obsahujúcej tri zložky antigén + protilátka + komplement; 2. fáza (indikátor) - detekcia voľného komplementu v zmesi pridaním hemolytického systému pozostávajúceho z ovčích erytrocytov a hemolytického séra obsahujúceho protilátky proti nim. V 1. fáze reakcie pri tvorbe komplexu antigén-protilátka dochádza k väzbe komplementu a následne v 2. fáze nedôjde k hemolýze erytrocytov senzibilizovaných protilátkami; reakcia je pozitívna. Ak si antigén a protilátka navzájom nezodpovedajú (v testovanej vzorke nie je antigén alebo protilátka), komplement zostáva voľný a v 2. fáze sa spojí s komplexom erytrocyt-antierytrocytová protilátka, čo spôsobí hemolýzu; reakcia je negatívna.

Aplikácia. RSK sa používa na diagnostiku mnohých infekčných chorôb, najmä syfilisu (Wassermanova reakcia).

HEMAGLUTINÁCIA(grécky, haima krv + lat. aglutinatio lepenie) - fenomén lepenia erytrocytov. Hemaglutinácia môže byť priama, t.j. môže nastať v dôsledku priameho účinku určitých činidiel na erytrocyty, a nepriama (pasívna), keď sú erytrocyty ošetrené antigénom (alebo protilátkami) aglutinované imunitným sérom (alebo antigénom).

Priamu hemaglutináciu môžu spôsobiť antierytrocytové séra, extrakty zo slinných tkanív, ľudské a zvieracie sérum, ako aj niektoré baktérie (stafylokoky, coli týfus, paratýfus, mikróby dyzentérie) a mnohé vírusy. Aglutinácia erytrocytov normálnymi sérami sa delí na izohemaglutináciu, ak sérum a erytrocyty patria jedincom rovnakého druhu, a na heteroaglutináciu, keď sa cudzie erytrocyty zlepia.

Sérum môže získať schopnosť G. pri určitých chorobách. Čiže napríklad sérum pacientov infekčná mononukleóza aglutinuje ovčie erytrocyty (pozri Paul-Bunnellovu reakciu).

G. spôsobená vírusmi má veľký teoretický a praktický význam. Prvýkrát ho opísali v roku 1941 G. K. Hirst, McClelland a Hare (L. Mac Clelland, R. Hare). Zistili, že vírus chrípky aglutinuje kuracie erytrocyty, na základe čoho bol vyvinutý hemaglutinačný test (RHA). Následne sa v mnohých vírusoch zistili hemaglutinačné vlastnosti. Hemadsorpcia je tiež spojená s G. fenoménom, t.j. schopnosťou buniek infikovaných niektorými hemaglutinačnými vírusmi adsorbovať erytrocyty na ich povrchu (pozri Hemadsorpcia). Schopnosť vírusov spôsobovať G. je potlačená príslušnými antivírusovými sérami, ktoré sa využívajú pri reakcii inhibície (splácania) hemaglutinácie (RTGA).

RGA a RTGA sa široko používajú ako v teoretických štúdiách v oblasti virológie, tak aj v diagnostike vírusových infekcií na indikáciu, identifikáciu a klasifikáciu vírusov, ako aj na detekciu antivírusových protilátok (antihemaglutinínov) v krvnom sére pacientov . Pri izolácii vírusov chrípky a mumpsu je teda indikátorom aglutinácia kuracích erytrocytov alantoickou a plodovou vodou infikovaných kuracích embryí.

Na účely identifikácie sa využíva selektívna schopnosť niektorých vírusov aglutinovať určitý typ červených krviniek. Vírus osýpok napríklad aglutinuje len opičie erytrocyty, zatiaľ čo vírus myšacej encefalomyokarditídy aglutinuje ovčie erytrocyty.

Vo väčšine vírusov je štrukturálnou zložkou viriónu hemaglutinín (substrát zodpovedný za G.).

Pri vírusoch, ktorých kapsida je obalená vo vonkajšom lipoproteínovom obale (vírusy chrípky, parainfluenzy, väčšina arbovírusov), sa hemaglutinín nachádza v tomto obale a je štrukturálne spojený s tzv. klky. Podľa chem. príroda Hemaglutiníny týchto vírusov sú glyko- alebo lipoproteíny. Hemaglutinín vírusu chrípky je teda tetramér pozostávajúci z dvoch párov glykoproteínov s celkovým mol. hmotnosti 150 000. Hemaglutinačný glykoproteín obalu arbovírusov skupiny B má mol. hmotnosť 50 000.

Vo vírusoch, ktoré nemajú vonkajší obal, je hemaglutinín spojený s kapsidovými štruktúrami. V adenovírusoch teda majú fibrily vychádzajúce z apikálnych kapsomérov hemaglutinačný účinok.

Hemaglutinín vírusov kiahní je lipoproteín a je jedným z produktov ich reprodukcie, ale zjavne nie je zahrnutý v zložení viriónu, pretože purifikované vírusové častice nespôsobujú G..

G. môže spôsobiť infekčné vírusové častice aj inaktivované, takže hemaglutinačný titer vírusu neodráža jeho infekčnú aktivitu. V niektorých prípadoch môže byť hemaglutinín oddelený od vírusovej častice (napr. v adenovírusoch). Niektoré vírusy (chrípka, osýpky, ECHO) môžu pri svojom rozmnožovaní vytvárať prázdne virióny bez RNA, ktoré majú aj hemaglutinačný účinok.

G. mechanizmus skúmal hl. arr. pri pokusoch s vírusom chrípky. Jeho interakcia s erytrocytmi prechádza dvoma fázami - adsorpciou a následnou elúciou (pozri). Prvá fáza adsorpcie vírusov na erytrocytoch je fyzická. proces a je určený rozdielom náboja a medzimolekulovou príťažlivosťou (van der Waalsove sily). Druhým krokom je chem. interakcia vírusu s receptormi erytrocytov.

Mechanizmus samotného procesu aglutinácie erytrocytov nie je celkom jasný. Môže byť dôležité zmeniť elektrostatický náboj erytrocytov po adsorpcii vírusov na ne.

Je tiež možné, že vírusové častice vytvárajú „mosty“ medzi jednotlivými erytrocytmi.

Spojením vírusu chrípky a niektorých paramyxovírusov s povrchom erytrocytov sú receptory erytrocytov, ktorými sú disacharid 6-(N-acetylneuraminyl)alfa-D-N-acetylgalaktozamín. Pôsobením vírusového enzýmu neuraminidázy sa erytrocytové receptory štiepia na N-acetylgalaktozamín a kyselinu N-acetylneuramínovú.

Pri t ° 37 °, po niekoľkých hodinách, sa vírus chrípky eluuje z erytrocytov. V hypertonickom roztoku chloridu sodného tento proces prebieha (rýchlejšie. V dôsledku deštrukcie receptorov strácajú erytrocyty svoju schopnosť opäť aglutinovať s tým istým vírusom, hoci sa vplyvom množstva iných vírusov môžu zlepiť.

Glykoproteínové receptory erytrocytov môžu byť tiež zničené jodistanom, trypsínom a filtrátom vibrio cholerae obsahujúcim neuraminidázu.

Väčšina ostatných vírusov (pox, arbovírusy atď.) receptory erytrocytov nezničí. K ich elúcii nedochádza spontánne, ale vplyvom imunitného séra, zmien elektrolytového zloženia média, jeho pH atď.

G. závisí od vlastností vírusu aj erytrocytov (tabuľka).

VÍRUSY, KTORÉ MÔŽU U NIEKTORÝCH STAVOVCOV SPÔSOBIŤ AGLUTINÁCIU ERYTROCYTOV

Hemaglutinačná aktivita je odlišná medzi členmi rovnakej klasifikačnej skupiny, ako aj v rôznych kmeňoch toho istého vírusu a dokonca aj v jednotlivých klonoch toho istého kmeňa. Napr. rozdiely medzi kmeňmi sú vyjadrené v enterovírusoch niektorých sérotypov. V populácii vírusu Coxsackie A-21 sa našli hemaglutinačné častice aj častice, ktoré túto vlastnosť nemajú.

Na získanie viditeľného G. musí vírusová suspenzia obsahovať najmenej 105-106 vírusových častíc na 1 ml.

Hemaglutinačná aktivita niektorých vírusov (napr. osýpok, mumpsu, ružienky) sa môže zvýšiť ošetrením vírusovej suspenzie tweenom-80 a éterom, pravdepodobne v dôsledku rozpadu vonkajšieho obalu vírusu.

G. závisí aj od prostredia na kultiváciu vírusu a od prítomnosti inhibítorov, ktoré tento proces blokujú.

Napríklad pri kultivácii vírusu Coxsackie A-21 v transplantovaných bunkách malígneho pôvodu vznikajú len nehemaglutinujúce častice. Zdrojom príjmu hemaglutinačných antigénov arbovírusov je Ch. arr. mozog infikovaných dojčiacich myší obsahujúci mnohé inhibítory G. Preto sa na prípravu týchto antigénov používa extrakcia mozgového tkaniva roztokom boritanovej soli s pH 9,0, čistenie freónom a zrážanie acetónom.

Odblokovanie hemaglutinínu s veľkou účinnosťou je možné dosiahnuť aj dodatočným spracovaním suspenzie tweenom-80 a éterom, ultrazvukom a trypsínom v nízkych koncentráciách.

Schopnosť niektorých vírusov spôsobiť G. závisí od počtu pasáží v tom či onom substráte. Tu je prispôsobenie vírusu podmienkam kultivácie a zvýšenie aktivity jeho reprodukcie na úroveň, kedy sa koncentrácia vírusových častíc stáva dostatočnou na objavenie sa G. Niekedy sa pozoruje inverzný vzťah: s počtom pasáží , hemaglutinačná aktivita vírusu klesá, až úplne vymizne. Je možné, že tieto javy sú založené na selekcii (počas pasáží) hemaglutinujúcich alebo nehemaglutinujúcich častíc.

Z faktorov, ktoré charakterizujú erytrocyty, má osobitný význam ich druhová príslušnosť.

Schopnosť erytrocytov aglutinovať konkrétnym vírusom je stanovená empiricky. Typicky vírusy patriace do rovnakej klasifikačnej skupiny aglutinujú rovnaké typy červených krviniek. Zároveň sú dôležité aj individuálne vlastnosti darcu.

G. ovplyvňuje aj vek a pohlavie darcu. Napríklad vírus vakcínie je aktívnejší pri aglutinácii erytrocytov dospelých kurčiat ako u kurčiat.

Pre prácu s arbovírusmi sa uprednostňujú erytrocyty mladých vtákov. Okrem toho sa odporúča používať erytrocyty radšej ako erytrocyty z husí, pretože hormonálne posuny počas znášky a inkubácie vajec menia povrchové vlastnosti erytrocytov, v dôsledku čoho sa môžu stať odolnejšími voči pôsobeniu vírusu alebo majú tendenciu spontánne sa aglutinovať.

Erytrocyty niektorých živočíšnych druhov (králiky, potkany, myši) často spôsobujú spontánnu aglutináciu, čo sa musí brať do úvahy pri vývoji štandardných stavov G. s každým vírusom. Vtáčie erytrocyty sú uprednostňované pred erytrocytmi cicavcov, pretože sa rýchlo usadzujú, poskytujú jasný obraz a sú menej náchylné na spontánnu aglutináciu. Pri stagingu RHA s určitými vírusmi, napríklad vírusom chrípky, sa môžu použiť čerstvé erytrocyty aj erytrocyty konzervované 25 % formalínom.

G. závisí od elektrolytového zloženia média, koncentrácie vodíkových iónov a teploty. V prostredí bez elektrolytov nedochádza k aglutinácii erytrocytov vírusmi.

Existuje určité optimálne zloženie elektrolytu média; napríklad adsorpcia hemaglutinínov vírusu vakcínie na kuracích erytrocytoch je maximálna pri 0,45 až 1,8 % chloridu sodného.

Vyhlásenie RHA sa uskutočňuje pri t ° 4; 20-25 alebo 37°. Vírus chrípky napríklad najlepšie aglutinuje erytrocyty pri t° 4°, vírus vakcínie pri t° 37° a pri G. arboviruses nezáleží na teplote.

Požiadavky rôznych vírusov na koncentráciu vodíkových iónov tiež nie sú rovnaké. Väčšina z nich spôsobuje G. pri pH 6,0-8,5. Preto sa ako médium najčastejšie používa izotonický roztok chloridu sodného, ​​ku Kromovi sa niekedy pridáva 0,014 M fosfátový tlmivý roztok s pH 7,2 (pre G. s vírusmi chrípky, osýpok, vaccinia a pod.).

Arbovírusy, ktorých schopnosť G. je veľmi slabá, vyžadujú presne definovanú koncentráciu vodíkových iónov: odchýlka od pH, ktorá je optimálna pre každý vírus, je povolená nie viac ako 0,3-0,4 jednotiek.

Keďže hemaglutiníny týchto vírusov sú stabilné iba v alkalické prostredie(pri pH 9,0), a zóna s pH 5,6-7,0 je optimálna pre RGA, potrebná koncentrácia vodíkových iónov sa vytvorí v čase spojenia antigénu s erytrocytmi, pridaním erytrocytov v kyslom tlmivom roztoku do alkalickej suspenzie vírusu.

Zloženie tlmivých roztokov môže ovplyvniť druhové spektrum citlivosti erytrocytov. Ak napríklad vírus rubeoly aglutinuje erytrocyty kurčiat, holubov a husí v médiu bežného zloženia, potom pri použití 0,025 M HEPES-tlmivého roztoku (N-2-hydroxyetylpiperazín - kyselina N12-etánsulfuová) pH 6,2 s prídavkom 0,4 M NaCl, 0,001 M CaCl2, 1% hovädzí sérový albumín a 0,00025% želatína, tiež aglutinuje erytrocyty dospelých kurčiat, ľudí (krv skupiny 0), opíc, oviec, ošípaných, mačiek, králikov, potkanov, škrečkov a myší.

Na potvrdenie špecificity vírusového G., ako aj na detekciu vírusových antihemaglutinínov v sére so sérolom, je výskum RTGA. Jeho špecifickosť nie je rovnaká pre rôzne skupiny vírusov. Pre arbovírusy rodu alfa a flavivírusy je RTGA skupinovo špecifický, t.j. odhaľuje antigénne vzťahy medzi členmi tejto skupiny. Sťažuje to odhad výsledkov sérol, skúmanie existencie v ktoromkoľvek okrese viacerých vírusov jednej skupiny. V adeno- a reovírusoch sa pomocou RTGA odhalia typovo špecifické znaky a pri chrípkových vírusoch sa zachytia aj jemné rozdiely medzi kmeňmi rovnakého druhu.

Pre RTGA je žiaduce použiť vysoko aktívne antigény. Antigény s nízkou aktivitou často obsahujú veľa nehemaglutinujúcich vírusových častíc, ktoré sa môžu viazať na protilátky a brániť ich detekcii. Pri použití infikovaných bunkových kultúr ako zdroja hemaglutinínu je sérum vylúčené zo zloženia média alebo sú z neho predtým odstránené G inhibítory.

Blokovanie G. sérových inhibítorov na neho. zloženie sú hlavne beta-lipoproteíny a veľkosť molekúl je blízka 198-protilátkam. Sérum testované v RTHA sa zbavuje inhibítorov zahriatím na 56 alebo 62° po dobu 30 minút, ošetrením filtrátom vibrio cholerae alebo neuraminidázy, trypsínom, adsorpciou inhibítorov kaolínom, vyzrážaním protilátok acetónom, ošetrením chloridom horečnatým a heparín, ošetrenie síranom dextránom a chloridom vápenatým, ošetrenie rivanolom. Účinnosť jednotlivých metód vo vzťahu k odstraňovaniu rôznych inhibítorov nie je rovnaká. Prvé tri metódy sú dostatočné na odstránenie inhibítorov G. spôsobených vírusmi chrípky a parainfluenzy. Liečba sér kaolínom a acetónom sa používa pri práci s arbovírusmi, rivanolom a pri štúdiu enterovírusových infekcií. Pri detekcii protilátok proti vírusu rubeoly sa používa liečba kaolínom, chloridom horečnatým a heparínom alebo dextránsulfátom a chloridom vápenatým.

Séra študované v RTGA tiež neobsahujú aglutiníny typu erytrocytov, ktoré sa používajú pri formulácii reakcie. To sa deje adsorpciou aglutinínov koncentrovanou suspenziou týchto erytrocytov.

Technika nastavenia RGA a RTGA

Reakcie sa umiestnia do skúmaviek alebo na doštičky z organického skla s priehlbinami. Široko sa používa mikrometóda využívajúca Takachiho mikrotitra, čo je súprava malých doštičiek s priehlbinami v tvare U, súprava kvapkadiel a riedidiel. Objem reakčnej zmesi v makro metóde je 0,8 ml a v mikro metóde je 0,1 ml. Červené krvinky sa používajú v koncentrácii 0,25 až 1 %. Na nastavenie RHA, 0,2 (0,025) ml antigénu, 0,2 (0,025) ml soľný roztok a 0,4 (0,05) ml suspenzie erytrocytov. V RTGA sú zachované rovnaké pomery zložiek, ale namiesto fyziologického roztoku sa pridáva testovacie sérum. V RHA stanovte titer hemaglutinínu, t.j. najväčšie riedenie, ktoré dáva číre G. Množstvo hemaglutinínu obsiahnuté v 0,2 ml tohto riedenia bude jedna hemaglutinačná jednotka (HE). Na titráciu séra v RTHA sa v závislosti od charakteristík vírusu používa 4-8 aglutinačných jednotiek (AU).

Výsledky reakcie, t.j. prítomnosť alebo neprítomnosť G., sa hodnotí podľa charakteru sedimentu erytrocytov (obr.). Aglutinované erytrocyty sa usadzujú vo forme filmu, niekedy so zubatými okrajmi, ktorý pripomína prevrátený dáždnik. Pri absencii aglutinácie sa erytrocyty hromadia v strede vybrania vo forme kompaktného disku. Čas potrebný na sedimentáciu erytrocytov sa pohybuje od 45 minút. do 2 hodín. v závislosti od druhu erytrocytov, objemu reakčnej zmesi a teploty. "Ťažké", jadrové erytrocyty vtákov sa usadzujú rýchlejšie. G. sa vyskytuje rýchlejšie pri vyššej teplote ako pri nižšej.

Reakcia nepriamej (pasívnej) hemaglutinácie (RNHA alebo RPHA) má dve hlavné odrody: a) aglutináciu erytrocytov senzibilizovaných antigénom, imunitným sérom; b) aglutinácia erytrocytov senzibilizovaných protilátkami v prítomnosti antigénu. Existujú dve fázy reakcie. Počas prvej dochádza k zmene povrchových vlastností erytrocytov v dôsledku adsorpcie antigénov (alebo protilátok) na ne. V druhej fáze sa protilátky (alebo antigény) adsorbujú na senzibilizované erytrocyty a vytvárajú sa konglomeráty.

Na diagnostické účely s bakteriálnymi antigénmi použili RNHA A. T. Kravchenko a M. I. Sokolov v roku 1946. V alkalickom prostredí sa z bakteriálnych buniek extrahoval polysacharidový antigén, adsorboval sa na ľudské erytrocyty 0. skupiny a ihneď sa spojil s diagnostickým sérom. Metóda nevyžaduje prideľovanie čistých kultúr baktérií, pretože adsorpcia antigénu môže byť uskutočnená priamo z patolového materiálu. Pomocou tejto techniky bolo možné v 1 ml fyziologického roztoku detegovať také množstvo antigénu, ktoré zodpovedá 50-100 miliónom mikrobiálnych teliesok, stanovených optickým štandardom.

RNHA podľa Kravčenka a Sokolova a jej modifikácie sa využívali v bakteriológii, ale jej možnosti boli obmedzené skutočnosťou, že na natívne erytrocyty sa môžu adsorbovať iba polysacharidové antigény a nie proteíny. Ale v roku 1951 Boyden (S. V. Boyden) ukázal, že erytrocyty leptané kyselinou tanínovou získavajú schopnosť adsorbovať proteíny na svojom povrchu (pozri Boydenova reakcia).

V roku 1956 Rycay (T. Rycaj) modifikoval Boydenovu techniku: erytrocyty sa senzibilizujú protilátkami a používajú sa na detekciu rôznych antigénov. Na adsorpciu na erytrocytoch sa používa imunoglobulín imunitného séra. RNHA podľa Knighta je možné použiť nielen na indikáciu antigénov, ale aj na titráciu sér pomocou fenoménu zhášania alebo inhibície RNHA. V tomto prípade sa študované sérum vo vhodných riedeniach spojí s antigénom, proti ktorému sa predpokladá detekcia protilátok, a následne sa pridajú senzibilizované erytrocyty. V prítomnosti protilátok sa na ne antigén naviaže a nedochádza k aglutinácii. Pri štúdiu séra, ako podľa pôvodnej Boydenovej metódy, tak aj podľa Knighta, by sa mali najskôr zo séra odstrániť inhibítory a heterohemaglutiníny.

Mechanizmus RNGA nie je dobre pochopený; v tomto smere sa pri voľbe podmienok pre senzibilizáciu erytrocytov rôznymi antigénmi a protilátkami, ako aj pri voľbe typu erytrocytov používa najmä empirický prístup.

Adsorpčná aktivita natívnych erytrocytov je nízka, ale možno ju zvýšiť ošetrením erytrocytov tanínom, akroleínom, glutaraldehydom a bidiazotovanými zlúčeninami (hemaglutinačný agregát).

Na vytvorenie stabilných liekov sa vyvíjajú chemické metódy. naviazanie antigénu alebo protilátok na erytrocyty, najmä vytvorením diazoväzieb. Na tento účel sa používa napríklad diazotovaný benzidín, toluén-2,4-diizokyanát, vo vode rozpustný karbodiimid, difluórdinitrobenzén. Je opísané použitie 4,4-bis-difenyldiazóniumborofluoridu na pripojenie polykondenzovaných protilátok na erytrocyty barana na indikáciu patogénov rickettsiózy prenášaných kliešťami.

RNGA je široko používaný v bakteriológii. Pri more, cholere, brucelóze a tularémii sa využívajú oba typy reakcie, pri šarlach, záškrte a dyzentérii sa na detekciu botulotoxínu používa iba antigénny variant, erytrocyty senzibilizované protilátkami.

Vo virusol. V štúdiách bola RNHA prvýkrát vykonaná s vírusmi mumpsu a pseudomoru hydiny v rokoch 1946-1948, potom sa po takmer desaťročnej prestávke objavili správy o reprodukcii tejto reakcie s adenovírusmi, herpes vírusom, myxovírusmi, vírusom vakcínie, arbovírusmi, cytomegalovírusmi , vírus slintačky a krívačky, kuracia leukémia atď. Optimálne reakčné podmienky pre rôzne vírusy sa vyberajú individuálne.

Na zistenie vírusu kliešťovej encefalitídy je opísaná reakcia v modifikácii Knight. Erytrocyty senzibilizované imunoglobulínom zo séra koňa imúnneho voči kliešťová encefalitída, ktorý sa používa na označenie vírusov kliešťovej a škótskej encefalitídy v kultúre BNK-21. Na tento účel sa kvapalina obsahujúca vírus zriedi v 1 % roztoku normálneho konského séra s faktorom 2. 1 až 2 kvapky senzibilizovaných erytrocytov sa pridajú do 0,5 ml antigénu každého riedenia. Reakcia sa berie do úvahy po 1-2 hodinách. RNGA sa môže použiť na detekciu vírusu vakcínie a kiahní v laboratórnych kultúrach aj v patole, materiáli od pacientov (detritus a chrasty).

Bibliografia: Gaidamovich S. Ya a Casale J. Porovnávacia štúdia hemaglutinujúcich arbovírusových antigénov pripravených z tkanivových kultúr a z mozgu myší, Vopr, virusol., č. 2, str. 238, 1968; Levi M. I. a Basova H. N. Erytrocytové diagnostiky a ich využitie v sérológii, Probl. obzvlášť nebezpečné infekcie, c. 2, str. 207, Saratov, 1970; Noskov F. S. a kol., Aplikácia reakcie nepriamej hemaglutinácie pre laboratórna diagnostika prírodné kiahne, Vopr, virusol., č.3, s. 347, 1972;

Knight T. Detekcia botulotoxínu typu A v potravinách metódou špecifickej hemaglutinácie, Bull. Poliak, akademik Sciences, zväzok 4, JsTs 9, s. 341, 1956.

S. Ya Gaidamovič.