בפרקטיקה של אבחון מעבדתי של מחלות זיהומיות, לעיתים יש צורך לקבוע נוגדנים לא לפתוגן באופן כללי, אלא לחלק מהחלבונים (אנטיגנים) שלו, כלומר ספקטרום של נוגדנים ספציפיים. אם למטרה זו משתמשים בשיטה של בדיקת אימונוסורבנט המקושרת לאנזים, אז במקרה זה יש צורך לבודד ולטהר את האנטיגנים הדרושים מתרבות הפתוגן. החלבונים המתקבלים מוחלים בנפרד על השלב המוצק. במקרה של שימוש בצלחת 96 בארות - בכל באר, סוג אחד של אנטיגן. לאחר מכן נקבעים הנוגדנים הספציפיים בשיטה עקיפה.
לפי נוכחות של תגובה חיובית בבאר עם אנטיגן כזה או אחר, אפשר לשפוט את נוכחותם של הנוגדנים הספציפיים המתאימים. סוג זה של מערכות לבדיקת אנזים חיסוני מוצעות על ידי היצרנים, אולם בשל תכולת המידע הגדולה יותר וקלות הביצוע של המחקר עצמו, שיטת הספיגה החיסונית (Western blot) הפכה לנפוצה.
סיכה חיסונית מאפשרת לזהות נוגדנים בסרום הדם בו זמנית ובו זמנית באופן דיפרנציאלי לכל חלבוני הפתוגן המשמעותיים מבחינה אבחנתית. תרגום מאנגלית Western blot פירושו העברה מערבית (מילולית - כתם). ההיסטוריה של מונח יוצא דופן זה היא כדלקמן.
מדען בשם Southern (E. Southern) בשנת 1975 הציע לראשונה שיטה להעברת שברי DNA מופרדים אלקטרופורטית מג'ל לממברנה. לדברי המחבר, השיטה נקראה Southern blot, שפירושו "העברה דרומית". השיטה להעברת מולקולות RNA, בתורה, זכתה לכינוי Northern blot על ידי מומחים - "העברה צפונית". בהתחלה בתור בדיחה, ואחר כך השם הזה תוקן בספרות המדעית הרשמית.
G. Toubin בשנת 1979 פרסם את תוצאות הניסויים הראשונים על סופג חלבון. בהמשך למסורות של שמות "גיאוגרפיים" של שיטות להעברת מקרומולקולות ביולוגיות, שיטה זו נודעה כטרנספר "מערבי" - כתם מערבי.
בשלב הראשון של שיטה זו מתבצעת הפרדה אלקטרופורטית של תערובת חלבוני פתוגן בג'ל פוליאקרילאמיד בנוכחות סודיום דודציל סולפט (SDS). SDS, להיות שטחי חומר פעיל, עוטף באופן אחיד את מולקולות החלבון ונותן לכולן מטען שלילי בגודל שווה בערך. לכן, המולקולות נעות בשדה החשמלי בכיוון אחד, ומהירות התנועה תלויה רק בגודל המולקולה (המשקל המולקולרי) של החלבון.
כתוצאה מההליך האלקטרופורטי, מתקבלת צלחת ג'ל, שבעוביה חלבונים ממוקמים בצורה של אזורים ליניאריים דקים נפרדים. בכיוון התנועה הם מחולקים לפי הסדר הבא: חלבונים בעלי משקל מולקולרי גדול, כ-120-150 kDa, קרובים יותר להתחלה, וחלבונים בעלי מסה של 5-10 kDa התקדמו עוד אל קו הסיום. בשלב השני, לוחית הג'ל מונחת על יריעת ניטרוצלולוזה ומבנה זה מונח בין האלקטרודות של מקור ה-DC. תחת פעולת שדה חשמלי, חלבונים זורמים מהג'ל הנקבובי לממברנה צפופה יותר, שם הם מקובעים היטב.
הכתם שנוצר מטופל בתמיסה חוסמת המכילה חלבונים אדישים מבחינה אנטיגני ו/או חומרי ניקוי לא-יוניים (Tween 20), החוסמים אתרים נטולי אנטיגן על הממברנה. לאחר מכן חותכים את יריעת הממברנה לרצועות צרות כך שכל רצועה מכילה את כל השברים האנטיגנים. השלבים המתוארים מבוצעים על ידי היצרן.
מערכות בדיקה מסחריות לאיתור נוגדנים על ידי סופג חיסוני מכילות כתמים (רצועות או רצועות) מוכנות לניתוח. המשתמש קובע את כל הספקטרום של נוגדנים ספציפיים לחלבוני פתוגן בהתאם לתכנית השיטה העקיפה. ככרומוגן לביצוע תגובת צבע (אנזימטית), נעשה שימוש בחומר חסר צבע מסיס, שהתוצר שלו מקבל צבע, הופך לבלתי מסיס ושוקע (משקע) על ניטרוצלולוזה.
כתוצאה מתגובות חיסוניות ואנזימטיות עוקבות, בנוכחות נוגדנים לחלבונים פתוגנים בדגימת הבדיקה, מופיעים פסים רוחביים כהים על הכתם, שמיקומם נמצא באזור של חלבונים פתוגנים מסוימים. כל פס כזה מצביע על נוכחות של נוגדנים ספציפיים לאנטיגן המתאים. תוצאת מחקר שנערך בשיטת הסופג החיסונית מונפקת בצורה של רשימה של נוגדנים לחלבונים ספציפיים של הפתוגן. לדוגמה: "זוהו נוגדנים לחלבוני p17 ו-p24".
כתמי ניטרוצלולוזה לאחר הפיתוח יכולים להישמר במשך זמן רב בצורה מיובשת. עם זאת, עוצמת הצבע נחלשת משמעותית. ניתן לצלם כתמים רטובים או, באמצעות סורקים, ניתן להזין את התמונה הגרפית שלהם לזיכרון של מחשבים אישיים. תוכנות מחשב מיוחדות מאפשרות לך לעבד את התוצאות ולעקוב במהירות אחר הדינמיקה של ספקטרום הנוגדנים במהלך ניטור דינמי
Immunoblot עבור HIV מאפשר לך לזהות נוגדנים לחלבונים ויראליים המונחים על קרום ניטרוצלולוזה מיוחד. זהו מחקר מדויק ביותר הקובע נוכחות של שברים שבהם החלבונים העיקריים מסודרים בצורה של פסים קטנים.
המעטפת של נגיף ה-HIV-1 מכילה גליקופרוטאין במשקל מולקולרי של 41 קילו-דיסק עד 160 קילו-טון (קילודלטון). חשיבות רבה לספיגה חיסונית היא הגליקופרוטאין HIV-2 עם משקל מולקולרי של 32 עד 140 קילו. חלבוני הליבה של HIV-1 ואנזימי הנגיף הם חלבוני p17, p24, p55.
הגורם הסיבתי של HIV-2 מורכב מחלבונים המכונים p16, p25, p56. הם יוצרים את הקליפה הפנימית שלו. הגנום מורכב מ-6 גנים מווסתים ו-3 גנים מבניים. לעתים קרובות, במהלך חלוקת התא, מתרחשים אי דיוקים גנטיים ומופיעים מספר תת-סוגים של הפתוגן.
דגימות חיוביות
כדי למנוע שגיאות כאשר אבחון מעבדהזיהום ב- HIV, המטופל רושם מחקר נוסף. התוצאות שלו משולבות כחיוביות אם מתגלים נוגדנים ל-2 או 3 חלבוני HIV-1 או HIV-2.
Immunoblot מאשר את כל תוצאות ה-ELISA הטובות. במקרה זה מוצאים נוגדנים ל-gp120/160, gp41 או p24 שהם היחידות המבניות של שלושת הגנים העיקריים של איידס - gag, pol ו-env. בחלק מהחולים שיש להם תוצאות ELISA ו-PCR שליליות, האימונובלוט מציג מספר רצועות חיוביות. הרופא רושם מחקר p24 נוסף כדי לבצע את האבחנה הנכונה ולא לכלול את השלב המוקדם של זיהום HIV.
אם התוצאות שהתקבלו מוטלות בספק, מוצע למטופל לחזור על הבדיקה למשך 3 החודשים הבאים. כמעט כל המקרים של זיהום ב-HIV מאושרים באמצעות מערכת האימונובלוט Sanofi. ברוב המקרים מתגלים אנטיגנים של HIV, p25, gp110/120 ו-gp160 חלבונים, המעידים על זיהום בנגיף. בדיקה חיובית כוזבת רשומה בחולים הסובלים ממחלות רקמת חיבורשיש רמה מוגבהתבילירובין, בעת אינטראקציה עם אנטיגנים ויראליים שונים.
תוצאה שלילית
במקרה של חוסר בקווים חיוביים התואמים לחלבונים של נגיף האיידס, האימונובלוט מתפרש כתוצאה שלילית. הניתוח מאשר באופן חד משמעי את היעדר הדבקה בנגיף הכשל החיסוני או מצביע על "תקופת חלון". אם האימונובלוט שלילי, האדם אינו נשא של נגיף האיידס.
לצורך המחקר נלקחות דגימות של נסיוב הדם של חולים נגועים ב-HIV. הם מאוחסנים קפואים ב-20 מעלות צלזיוס. הניתוח מתבצע באמצעות מערכות בדיקה:
- אַנְטִיגֵן;
- רקומביננטי-HIV;
- פפטומסך.
רישום של תוצאה שלילית מעיד על היעדר נוגדנים לגליקופרוטאין של מעטפת HIV gp120, gp160, Sp41 בסרום.
לעתים קרובות, החולה מתעניין בשאלה האם יכולה להיות תוצאה אימונובלוט שלילית עבור HIV בחולה שיש לו בן זוג מיני נגוע. לאחר המחקר מתקבלת לעיתים קרובות תוצאה מפוקפקת או קבועים נוגדנים לחלבוני gp120 ו-gp160, מה שמעיד על היעדר מוחלט של נתונים שליליים. לעיתים נרשמה תגובה מפוקפקת בחולים עם זיהום א-סימפטומטי.
תוצאות בלתי ניתנות לפירוש
הניתוח המבוצע באמצעות בדיקות שונות לנוגדנים לזיהום ב-HIV, לעיתים אינו תואם תוצאות שליליות ואינו עומד בקריטריונים לסרוחיוביות. קשה לרופא לקבוע את הסיבה לתוצאה מפוקפקת.
חלק מהחולים אינם בסיכון לזיהום ב-HIV. הרופא עלול לטעות בפענוח תוצאות המחקר אם הזיהום נגרם מסרוטיפ אחר.
יש לבדוק בדינמיקה את סרום הדם של המטופל. אם לא נצפה במשך 6 חודשים ביטויים קלינייםאיידס ואין גורמי סיכון, החולה נרשם כלא זיהום.
תוצאות בדיקה מפוקפקות מתקבלות בחולים עם סיכון נמוך לזיהום. במקרים מסוימים, הופעת נתונים לא ברורים נגרמת על ידי קומפלקסים חיסוניים ונוגדנים עצמיים הכלולים בסרום הדם.
בחלק מהחולים, התרחשותן של תוצאות מפוקפקות נגרמת על ידי התפתחות של תהליכים פתולוגיים:
- מחלות מדבקות;
- גידול סרטני;
- תגובה אלרגית.
למטופל יש שינויים ב ניתוח קלינידם, צפה בצמיחה חלבון C-reactiveאו עלייה ב-ESR. אצל אנשים הסובלים ממחלות זיהומיות, לעתים קרובות מזוהה תגובה אימונובלוט מפוקפקת ל-HIV.
חולים עם תוצאות בלתי מוגדרות אינם יכולים לתרום דם או חומרים ביולוגיים.
שיטת קו
העיקרון של אימונובלוטינג כולל:
- שימוש בחומר ויראלי מקורי בפורמט HIV או אנטיגנים בפורמט Western-Blot.
- חיבור של חלבוני HIV עם נוגדנים בודדים שזוהו בסרום הדם.
- תהליך הדגירה המתרחש עם הוספת נוגדני Ig אנטי-אנושיים מסומנים.
- פענוח הפסים הצבעוניים.
הניתוח מאפשר לרופא לפרש בזמן את תוצאות המחקר. כתם חיובי מתפרש כ-2ENV+/- GAG+/POL, כתם בלתי מוגדר הוא 1 ENV+/- GAG+/POL. תוצאה שלילית פירושה שאין להקות.
כדי לבצע את הניתוח, משתמשים באימונובלוטים רקומביננטיים ו-lysate. המחקר הוא ספציפי והוא 99.5%.
האם ניתן לפענח את תוצאת הניתוח כשקרית, המטופלים מתעניינים. הנתונים המתקבלים יכולים להיווצר כתוצאה מגירוי של הגנות הגוף (הריון, המודיאליזה). אם יש חשד לתסמונת רטרו-ויראלית חריפה ומגע עם חולה עם זיהום ב-HIV, מומלץ לחולה לתרום סרום לתגובת PCR. בדיקה סרולוגית חוזרת מאושרת על ידי מדידת העומס הנגיפי בדגימה שהוגשה של חומר ביולוגי.
אבחון של HIV ביילודים
בדיקת איידס לילד צעיר מתבצעת אם נוצר מגע עם אם נגועה ב-HIV. תגובות סרולוגיות יכולות להיות חיוביות תוך 1.5 שנים. נוגדנים בסרום הדם של יילוד מתגלים באמצעות ELISA, RIF ותגובות סופג חיסון.
בתוך 9 חודשים מחייו של ילד, מופיעה תוצאה חיובית עקב נוכחותם של נוגדנים אימהיים בסרום הדם. לאנטיגן p24 יש סגוליות של כ-65%. במקרים מסוימים, לא ניתן לזהות נוגדנים אצל ילד חולה אם הוא מאובחן עם תכולה נמוכה מולדת של גלובולינים בדם. תוצאת immunoblot שלילית מבוססת אינה מבטיחה היעדר זיהום.
הבדיקה מתבצעת במספר שלבים:
- 1-2 ימים לאחר הלידה;
- תוך 1-2 חודשים;
- בגיל חצי שנה.
מחקר נוסף של נוגדנים מתבצע עד לקבלת 2 תוצאות אימונובלוט שליליות. האבחנה של איידס בילד שנולד לאישה נגועה ב-HIV אפשרי על בסיס 2 תוצאות חיוביות של תגובת PCR. העברת זיהום ב-HIV לילוד אינה נכללת אם האישה אינה מניקה.
לימוד במהלך ההריון
לאם לעתיד רושמים סופג חיסון וליניארי אם מתקבלת תוצאה חיובית ל-HIV על ידי ELISA. אם הכתם אושר, החולה סובל מאיידס. במקרה זה, החל מהשבוע ה-14 להריון, נקבע טיפול למניעת זיהום של הילד.
האם מומחה יכול לטעות בעת ביצוע בדיקת סרום דם במהלך ההריון, שואל המטופל את הרופא המטפל. הוא מחויב לתת לאישה ההרה עותקים של בדיקות PCR ו-ELISA כדי למנוע ספקות לגבי מהימנותן.
בעת הגדרת אימונובלוט, לפעמים מתעוררות בעיות, אך אם ה-ELISA, הכתם ו-PCR חיוביים, האבחנה של זיהום ב-HIV מאושרת לבסוף. הסבירות לקבל בדיקה חיובית כוזבת במהלך ההריון גבוהה. אם ה-ELISA הוא (+) והאימונובלוט (-), מוצע לאישה לקחת מחדש את סרום הדם.
בכרטיס החלפה של אישה בהריון מצוין תוצאת המחקר. עם ערכו החיובי, אסור לאישה להאכיל ילד לאחר הלידה, כדי לא להידבק בנגיף האיידס. המסקנות הסופיות מתקבלות על בסיס מחקרים מעבדתיים, קליניים ואפידמיולוגיים. רק לאחר הפענוח שלהם, החולה מאובחן עם זיהום HIV.
בקשר עם
תת לחץ דם, טכיקרדיה, קוצר נשימה, ציאנוזה. במקרים חמורים של המחלה יתכנו דימום, הקאות עם תערובת של דם. הכבד והטחול מוגדלים. שימו לב לאוליגוריה. הטמפרטורה נשארת גבוהה באופן עקבי במשך 3-10 ימים. בדם ההיקפי - לויקוציטוזיס נויטרופילי עם הסטה של הנוסחה שמאלה. בנוסף לביטויים הכלליים המתוארים של המגפה, מתפתחים נגעים האופייניים לצורות קליניות בודדות של המחלה.
הצורה העורית נדירה (3-5%). נקודה מופיעה באתר שער הכניסה של הזיהום, ולאחר מכן פפולה, שלפוחית (קונפליקט), מלאה בתוכן דימומי כבד, מוקף באזור חודר עם היפרמיה ובצקת. פליקטן מאופיין בכאבים עזים. כשפותחים אותו הוא יוצר כיב עם גלד כהה בתחתיתו. כיב מגיפה מאופיין במהלך ארוך, מרפא לאט, יוצר צלקת. אם צורה זו מסובכת על ידי ספטיסמיה, מתרחשים pustules וכיבים משניים. אולי התפתחות של בובו אזורי (צורה של עור בובוני).
צורת הבובה מופיעה לרוב (כ-80%) ומאופיינת במהלך שפיר יחסית. מהימים הראשונים של המחלה מופיע כאב חד באזור בלוטות הלימפה האזוריות, המקשה על התנועה וגורם למטופל לנקוט עמדה מאולצת. הבובו הראשוני, ככלל, הוא בודד; מספר רב של בובו נצפים פחות. ברוב המקרים, המפשעות והירך נפגעות, בית השחי וצוואר הרחם שכיחים מעט פחות. בלוטות הלימפה. גדלי Bubo משתנים מ אגוז מלךלתפוח בגודל בינוני. תכונות בהירות הן כאב חד, עקביות צפופה, הידבקות לרקמות הבסיסיות, חלקות קווי המתאר עקב התפתחות פריאדניטיס. בובו מתחיל להיווצר ביום השני למחלה. ככל שהוא מתפתח, העור מעליו הופך לאדום, מבריק, לעתים קרובות ציאנוטי. בהתחלה הוא צפוף, ואז הוא מתרכך, מופיעות תנודות, קווי המתאר נעשים מטושטשים. ביום 10-12 למחלה, הוא נפתח - פיסטולה, נוצר כיב. עם מהלך שפיר של המחלה וטיפול אנטיביוטי מודרני, נצפתה ספיגה או טרשת. כתוצאה מהחדרה המטוגנית של הפתוגן, יכולות להיווצר בובות משניות, המופיעות מאוחר יותר וקטנות בגודלן, פחות כואבות ובדרך כלל אינן מתפיחות. סיבוך אדיר של צורה זו יכול להיות התפתחות של צורה ריאתית משנית או ספיגה משנית, אשר מחמירה בחדות את מצבו של המטופל, עד למוות.
ריאתית ראשוניתהצורה נדירה, בתקופות של מגיפות ב-5-10% מהמקרים והיא המסוכנת ביותר במונחים אפידמיולוגיים והקשה ביותר. צורה קליניתמחלה. זה מתחיל בחדות, באלימות. על רקע תסמונת שיכרון בולטת, שיעול יבש, קוצר נשימה חמור, כאבי חיתוך בחזה מופיעים מהימים הראשונים. לאחר מכן, השיעול הופך להיות פרודוקטיבי, ומייצר ליחה שכמותה עשויה להשתנות מכמה ריקקים לכמויות עצומות, לעתים נדירות כלל. הליחה, בהתחלה מוקצפת, זגוגית, שקופה, ואז מקבלת מראה מדמם, מאוחר יותר הופך לדם טהור, מכיל כמות עצומה של חיידקי מגיפה. בדרך כלל זה עקביות נוזלית - אחד סימני אבחון. הנתונים הפיזיים מועטים: קיצור קל של צליל ההקשה על האונה הפגועה, במהלך ההשמעה, רעש מבעבע עדין לא שופע, אשר בבירור אינו תואם את מצבו החמור הכללי של המטופל. התקופה הסופית מאופיינת בעלייה בקוצר נשימה, כיחול, התפתחות קהות חושים, בצקת ריאות ו-TSS. לחץ הדם יורד, הדופק מואץ והופך לחוט, קולות הלב עמומים, היפרתרמיה מוחלפת בהיפותרמיה. בהיעדר טיפול, המחלה קטלנית תוך 2-6 ימים. עם שימוש מוקדם באנטיביוטיקה, מהלך המחלה שפיר, שונה מעט
אבחון בזמן של זיהום HIV הופך למדד חשוב ביותר, שכן טיפול מוקדם יותר יכול לקבוע במידה רבה את המשך התפתחות המחלה ולהאריך את חיי המטופל. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בתחום גילוי המחלה הנוראה הזו: מערכות הבדיקה הישנות מוחלפות במתקדמות יותר, שיטות הבדיקה נעשות נגישות יותר ודיוקן עולה משמעותית.
במאמר זה, נדבר על שיטות מודרניותאבחון של זיהום HIV, אשר שימושי לדעת לטיפול בזמן בבעיה זו ושמירה על איכות החיים התקינה של המטופל.
שיטות לאבחון HIV
ברוסיה, לאבחון של זיהום ב-HIV, הליך סטנדרטיהכולל שתי רמות:
- מערכת בדיקת ELISA (ניתוח סקר);
- סופג חיסון (IB).
ניתן להשתמש גם בשיטות אבחון אחרות:
- מבחנים אקספרס.
מערכות בדיקת ELISA
בשלב הראשון של האבחון, בדיקת סקר (ELISA) משמשת לאיתור זיהום ב-HIV, המבוססת על חלבוני HIV שנוצרים במעבדות הלוכדות נוגדנים ספציפיים המיוצרים בגוף בתגובה לזיהום. לאחר האינטראקציה שלהם עם הריאגנטים (אנזימים) של מערכת הבדיקה, צבע המחוון משתנה. יתר על כן, שינויי צבע אלה מעובדים בציוד מיוחד, הקובע את תוצאת הניתוח שבוצע.
בדיקות ELISA כאלה מסוגלות להראות תוצאות תוך מספר שבועות לאחר כניסת זיהום HIV. ניתוח זה אינו קובע את נוכחות הנגיף, אלא מזהה ייצור של נוגדנים אליו. לעיתים, בגוף האדם, ייצור הנוגדנים ל-HIV מתחיל לאחר שבועיים לאחר ההדבקה, אך אצל רוב האנשים הם מיוצרים במועד מאוחר יותר, לאחר 3-6 שבועות.
ישנם ארבעה דורות של בדיקות ELISA עם רגישויות שונות. בשנים האחרונות נעשה שימוש תכוף יותר במערכות בדיקה מדור III ו-IV, המבוססות על פפטידים סינתטיים או חלבונים רקומביננטיים ובעלות ספציפיות ודיוק גבוהים יותר. ניתן להשתמש בהם כדי לאבחן זיהום ב-HIV, לנטר את שכיחות ה-HIV ולהבטיח בטיחות בעת בדיקת דם שנתרם. הדיוק של מערכות בדיקת ELISA דורות III ו-IV הוא 93-99% (רגישות יותר הן הבדיקות שמיוצרות במערב אירופה - 99%).
לביצוע בדיקת ELISA נלקחים 5 מ"ל דם מהוריד המטופל. בין הארוחה האחרונה לניתוח צריך להיות לפחות 8 שעות (ככלל, זה מבוצע בבוקר על בטן ריקה). בדיקה כזו מומלץ לבצע לא לפני 3 שבועות לאחר ההדבקה לכאורה (לדוגמה, לאחר קיום יחסי מין לא מוגנים עם בן זוג חדש).
תוצאות בדיקת ELISA מתקבלות לאחר 2-10 ימים:
- תוצאה שלילית: מעידה על היעדר זיהום ב-HIV ואינה דורשת הפניה למומחה;
- תוצאה שלילית שגויה: ניתן לצפות ב- דייטים מוקדמיםזיהום (עד 3 שבועות), עם שלבים מאוחריםאיידס עם דיכוי חיסוני חמור ועם הכנת דם לא נכונה;
- תוצאה חיובית שגויה: ניתן להבחין בה במחלות מסוימות ובמקרה של הכנת דם לא נכונה;
- תוצאה חיובית: מעידה על זיהום זיהום ב-HIV, דורש IB והפניית המטופל למומחה במרכז לאיידס.
מדוע בדיקת ELISA יכולה לתת תוצאות חיוביות שגויות?
ניתן לראות תוצאות חיוביות שגויות של בדיקת ELISA ל-HIV עם עיבוד לא תקין של דם או בחולים עם מצבים ומחלות כאלה:
- מיאלומה נפוצה;
- מחלות זיהומיות שנגרמו על ידי נגיף אפשטיין-בר;
- מדינה אחרי;
- מחלות אוטואימוניות;
- על רקע הריון;
- מצב לאחר חיסון.
מהסיבות שתוארו לעיל, נוגדנים לא ספציפיים בעלי תגובה צולבת עשויים להיות נוכחים בדם, שייצורם לא עורר על ידי זיהום HIV.
בשנים האחרונות ירדה באופן משמעותי תדירות התוצאות החיוביות הכוזבות עקב שימוש במערכות בדיקות מדור III ו-IV, המכילות פפטיד וחלבונים רקומביננטיים רגישים יותר (הם מסונתזים באמצעות הנדסה גנטית חוץ גופית). לאחר השימוש בבדיקות ELISA כאלה, שכיחות התוצאות החיוביות השגויות ירדה משמעותית והיא כ-0.02-0.5%.
תוצאה חיובית כוזבת אינה אומרת שאדם נגוע ב-HIV. במקרים כאלה, ארגון הבריאות העולמי ממליץ על בדיקת ELISA נוספת (דור IV חובה).
הדם של המטופל נשלח למעבדת התייחסות או בוררות המסומנת "חזרה" ונבדק על מערכת בדיקת ELISA דור IV. אם התוצאה של הניתוח החדש שלילית, אז התוצאה הראשונה מזוהה כשגויה (חיובי שגוי) ו-IB לא מבוצע. אם התוצאה חיובית או מפוקפקת במהלך הבדיקה השנייה, המטופל נדרש לעבור IB תוך 4-6 שבועות כדי לאשר או להפריך זיהום ב-HIV.
סיכה חיסונית
אבחנה סופית של זיהום ב-HIV יכולה להיעשות רק לאחר קבלת תוצאה חיובית של ספיגת מערכת החיסון (IB). ליישומו, נעשה שימוש ברצועת ניטרוצלולוזה, עליה מורחים חלבונים ויראליים.
דגימת דם ל-IB מתבצעת מוריד. לאחר מכן הוא עובר טיפול מיוחד והחלבונים הכלולים בסרום שלו מופרדים בג'ל מיוחד לפי מטען ומשקלם המולקולרי (המניפולציה מתבצעת בציוד מיוחד בהשפעת שדה חשמלי). רצועת ניטרוצלולוזה מונחת על הג'ל בסרום הדם והספיגה ("ספיגה") מתבצעת בתא מיוחד. הרצועה עוברת עיבוד ואם החומרים המשמשים מכילים נוגדנים ל-HIV, הם נקשרים לרצועות האנטיגניות ב-IB ומופיעים כקווים.
IB נחשב חיובי אם:
- על פי קריטריונים של CDC אמריקאי - יש שתיים או שלוש שורות gp41, p24, gp120 / gp160 על הרצועה;
- לפי קריטריונים של ה-FDA האמריקאי - יש שני קווים p24, p31 וקו gp41 או gp120 / gp160 על הרצועה.
ב-99.9% מהמקרים, תוצאה חיובית של IB מצביעה על זיהום ב-HIV.
בהיעדר שורות - IB הוא שלילי.
כאשר מזהים קווים עם gp160, gp120 ו-gp41, IB מוטל בספק. ניתן לזהות תוצאה כזו כאשר:
- מחלות אונקולוגיות;
- הֵרָיוֹן;
- עירויי דם תכופים.
במקרים כאלה, מומלץ לבצע מחקר שני באמצעות ערכה של חברה אחרת. אם לאחר IB נוסף, התוצאה נותרת בספק, אזי יש צורך במעקב במשך שישה חודשים (IB מתבצע כל 3 חודשים).
תגובת שרשרת פולימראז
בדיקת PCR יכולה לזהות את ה-RNA של הנגיף. הרגישות שלו די גבוהה והוא מאפשר לזהות זיהום ב-HIV כבר 10 ימים לאחר ההדבקה. במקרים מסוימים, PCR יכול לתת תוצאות חיוביות שגויות, מכיוון שהרגישות הגבוהה שלו יכולה להגיב גם לנוגדנים לזיהומים אחרים.
טכניקת אבחון זו יקרה, דורשת ציוד מיוחד ומומחים מוסמכים ביותר. סיבות אלו אינן מאפשרות לבצע אותה במהלך בדיקות המוניות של האוכלוסייה.
PCR משמש במקרים כאלה:
- לגלות HIV בילודים שנולדו לאמהות נגועות ב-HIV;
- לגלות HIV ב"תקופת החלון" או במקרה של ספק IB;
- לשלוט בריכוז HIV בדם;
- לחקר דם תורם.
רק על ידי בדיקת PCR, האבחנה של HIV אינה מתבצעת, אלא מתבצעת כשיטת אבחון נוספת ליישוב מחלוקות.
שיטות אקספרס
אחד החידושים באבחון HIV הפך לבדיקות מהירות, שניתן להעריך את תוצאותיהן תוך 10-15 דקות. התוצאות היעילות והמדויקות ביותר מתקבלות בבדיקות אימונוכרומטוגרפיות המבוססות על עקרון הזרימה הנמית. הם רצועות מיוחדות שעליהן מורחים דם או נוזלי בדיקה אחרים (רוק, שתן). בנוכחות נוגדנים ל-HIV, לאחר 10-15 דקות, מופיע פס צבעוני ובקרה בבדיקה - תוצאה חיובית. אם התוצאה שלילית, רק שורת הבקרה מופיעה.
כמו בבדיקות ELISA, יש לאשר את תוצאות הבדיקה המהירות על ידי ניתוח IB. רק אז ניתן לאבחן זיהום ב-HIV.
יש ערכות אקספרס לבדיקה ביתית. בדיקת OraSure Technologies1 (ארה"ב) מאושרת על ידי ה-FDA, זמינה ללא מרשם וניתן להשתמש בה כדי לזהות HIV. לאחר הבדיקה, במקרה של תוצאה חיובית, מומלץ למטופל לעבור בדיקה במרכז מומחה לאישור האבחנה.
שאר הבדיקות לשימוש ביתי טרם אושרו על ידי ה-FDA והתוצאות שלהן עשויות להיות מוטלות בספק רב.
למרות העובדה שבדיקות מהירות נחותות בדייקנות מבדיקות ELISA דור IV, הן נמצאות בשימוש נרחב לבדיקות נוספות של האוכלוסייה.
ניתן להיבדק להידבקות ב-HIV בכל מרפאה, בבית החולים האזורי המרכז או במרכזי איידס מיוחדים. בשטחה של רוסיה, הם מוחזקים בסודיות מוחלטת, או בעילום שם. כל מטופל יכול לצפות לקבל ייעוץ רפואי או פסיכולוגי לפני או אחרי הניתוח. עבור בדיקות HIV תצטרכו לשלם רק במוסדות רפואיים מסחריים, ובמרפאות ציבוריות ובבתי חולים הן מתבצעות ללא תשלום.
למידע על איך אתה יכול להידבק ב-HIV ואיזה מיתוסים קיימים לגבי האפשרויות להידבק, קרא
שמו הוא איידס ויאצ'סלב זלמנוביץ טרנטול
Immunoblotting - שיטה עקיפה נוספת
בנוסף ל-ELISA, במקרים מסוימים, נעשה שימוש בהליך הנקרא "אימונובלוטינג" או "אימוניות" (לפעמים נקרא גם "כתם מערבי") לבדיקת הידבקות ב-HIV. על פי המלצת ארגון הבריאות העולמי, אימונובלוטינג משמש באבחון זיהום ב-HIV כשיטה נוספת של מומחה, שאמורה לאשר את תוצאות ה-ELISA. בדרך כלל משתמשים בשיטה זו כדי לבדוק פעמיים תוצאת ELISA חיובית, מכיוון שהיא נחשבת רגישה וספציפית יותר, אם כי מורכבת ויקרה יותר. אבל לפני החתימה על פסק הדין הסופי על המטופל, הרופא חייב להיות משוכנע לחלוטין בנכונות האבחנה. לכן, שאלת המורכבות והעלות הגבוהה אינה יכולה להכריע כאן.
הן מבחינת מטרת הביצוע והן מבחינת שיטת הביצוע, הביטוי הידוע "לשים סופג" מתאים היטב לספיגה חיסונית. סופג חיסון משתלב בדיקת אימונוסורבנט מקושרת(ELISA) עם הפרדה אלקטרופורטית מקדימה של חלבוני וירוס בג'ל והעברתם לממברנה ניטרוצלולוזה ("בלוטר"). הליך האימונובלוט מורכב ממספר שלבים (איור 27). ראשית, מטוהר מראש והושמד למרכיביו המרכיבים, HIV נתון לאלקטרופורזה, בעוד שכל האנטיגנים המרכיבים את הנגיף מופרדים לפי משקל מולקולרי. לאחר מכן, על ידי ספיגה (בדומה לסחיטת עודף דיו על גבי "פלוטר"), האנטיגנים מועברים מהג'ל לרצועה של ניטרוצלולוזה או מסנן ניילון, המכילים כעת מגוון חלבונים האופייניים ל-HIV שאינם נראים לעין. . לאחר מכן, מורחים על הרצועה את חומר הבדיקה (סרום, פלזמת הדם של המטופל וכו', ואם יש נוגדנים ספציפיים בדגימה, הם נקשרים לרצועות חלבוני האנטיגן התואמות אותם באופן מוחלט. כתוצאה ממניפולציות עוקבות (כמו ELISA), תוצאת האינטראקציה הזו מוצגת - הופכת לגלויה. בסופו של דבר, נוכחות של פסים באזורים מסוימים של הרצועה מאשרת את נוכחותם של נוגדנים לאנטיגנים של HIV מוגדרים בקפדנות בסרום הנחקר.
אימונובלוטינג משמש לרוב כדי לאשר את האבחנה של זיהום ב-HIV. ארגון הבריאות העולמי רואה סרה חיובית אם מתגלים נוגדנים לכל שניים מחלבוני מעטפת ה-HIV על ידי אימונובלוטינג. על פי המלצות אלו, אם יש תגובה עם אחד מחלבוני המעטפת בלבד (gp160, gp120, gp41), בשילוב או ללא תגובה עם חלבונים אחרים, התוצאה נחשבת כספק ובדיקה שניה באמצעות ערכה מסדרה אחרת או מחברה אחרת מומלץ. לביטוח, אם
אורז. 27. לאימונובלוטינג, בשלב הראשון, חלבונים הכלולים בסרום הדם מופרדים בג'ל לפי משקלם המולקולרי והמטען באמצעות שדה חשמלי (שיטת ג'ל אלקטרופורזה). לאחר מכן מורחים על הג'ל קרום ניטרוצלולוזה או ניילון ו"מרטיבים" (זהו סופג). זה מתבצע בתא מיוחד, המאפשר העברה מלאה של החומר מהג'ל אל הממברנה. כתוצאה מכך, דפוס סידור החלבון שהיה על הג'ל משוכפל על הממברנה (כתם), אשר לאחר מכן ניתן לתמרן בקלות. בתחילה, הממברנה מטופלת בנוגדנים לאנטיגן הרצוי, ולאחר שטיפת החומר הלא קשור, מתווסף מצמיד מסומן רדיואקטיבית שנקשר ספציפית לנוגדנים (כמו ב-ELISA). המיקום של קומפלקס המצומד המתקבל עם אנטיגן-נוגדנים נקבע על ידי אוטורדיוגרפיה באמצעות סרט רנטגן. לאחר ביטויו מתברר אם יש אנטיגנים בדם או אין, ולאחר מכן התוצאה נותרת בספק, מומלץ מעקב של חצי שנה (המחקר נמשך כל שלושה חודשים).
נכון לעכשיו, בפדרציה הרוסית, מומלץ להשתמש בחמש מערכות בדיקה לשימוש באבחון זיהום ב-HIV, ביניהן יש גם רוסיות וגם זרות.
מתוך הספר הרדמה והחייאה מְחַבֵּר מרינה אלכסנדרובנה קולסניקובה מתוך הספר מוזרויות של הגוף שלנו. אנטומיה משעשעת מאת סטיבן חואן מתוך הספר מדריך עזרה ראשונה הסופר ניקולאי ברג מתוך הספר איך להפסיק לעשן ב-100%, או לאהוב את עצמך ולשנות את חייך הסופר דיוויד קיפניס מתוך הספר המדריך השלם לאחיות מְחַבֵּר אלנה יורייבנה חרמובה מתוך הספר מדריך טיפול דחוף מְחַבֵּר אלנה יורייבנה חרמובה מתוך הספר ניתוח קיסרי: מוצא בטוח או איום על העתיד? מאת מישל אודן מאת גארי גריפין מתוך הספר כיצד להגדיל את גודל הפין הגברי מאת גארי גריפין מתוך הספר Flatfoot. רוב שיטות יעילותיַחַס מְחַבֵּר אלכסנדרה וסילייבה מתוך הספר יופי ובריאות של אישה מְחַבֵּר ולדיסלב גנאדייביץ' ליפליאנדסקי מתוך הספר יוגה ותרגולים מיניים מאת ניק דאגלס
