אתר בנושא שלשולים ובעיות עיכול
→ ↓

אנטי HIV 1 2 מה. אבחון ELISA: מהי המהות, הגדרת הנוגדנים, כיצד היא מתבצעת ובאילו מחלות היא יעילה? מידע כללי על המחקר

אליסה ( בדיקת אימונוסורבנט מקושרת, ELISA - אנגלית) נכנס לחיי הרפואה המעשית במקום אחר בשנות ה-60 של המאה הקודמת. משימתו הראשונית הייתה מחקר היסטולוגי למטרות מדעיות, שהוגבל לחיפוש וזיהוי של המבנה האנטיגני של תאי אורגניזם חי.

שיטת ELISA מבוססת על אינטראקציה של אנטיגנים ספציפיים (AT) ואנטיגנים קשורים (AG) עם יצירת קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, המתגלה באמצעות אנזים. עובדה זו הובילה את המדענים לרעיון שניתן להשתמש בשיטה למטרות אבחון כדי לזהות אימונוגלובולינים ספציפיים ממעמדות שונים המעורבים בתגובה החיסונית לזיהום מסוים. וזו הייתה פריצת דרך באבחון מעבדה קליני!

השיטה החלה להיות בשימוש פעיל רק בתחילת שנות ה-80, ולאחר מכן בעיקר במוסדות מיוחדים. מנתחי ה-ELISA הראשונים סופקו למרכזים ותחנות עירוי דם, לבתי חולים זיהומיות ומין, שכן האיידס האימתני, שנולד ביבשת אפריקה, הופיע אצלנו באופק ומיד הצטרף לזיהומים "הישנים", דרש אמצעים מיידיים לאבחון ו חיפוש אחר תרופות טיפוליות שמשפיעות עליו.

היקף שיטת ELISA

האפשרויות של בדיקת אנזים אימונו הן נרחבות באמת.עכשיו קשה לדמיין איך אתה יכול בלי מחקרים דומיםמשמש ממש בכל ענפי הרפואה. נראה ש-ELISA יכול לעשות באונקולוגיה? מסתבר שזה יכול. והרבה. יכולת הניתוח למצוא סמנים האופייניים לסוגים מסוימים של ניאופלזמות ממאירות עומדת בבסיס הגילוי המוקדם של גידול, כאשר הוא עדיין לא מזוהה בדרך אחרת בשל גודלו הקטן.

לאבחון מעבדה קליני מודרני (CDL), בנוסף לסמני הגידול, יש ארסנל משמעותי של פאנלים עבור ELISA ומשתמש בהם לאבחון מצבים פתולוגיים שונים (תהליכים זיהומיים, הפרעות הורמונליות) ולנטר תרופות פרמצבטיות על מנת לזהות את השפעתן על המטופל. גוף ודרך אגב לא רק אנושי. נכון להיום, בדיקת אנזים חיסונית נמצאת בשימוש נרחב בשירות הווטרינרי, מכיוון ש"אחינו הקטנים" גם רגישים למחלות רבות, מהן, לפעמים, הם סובלים מאוד.

בדרך זו, ELISA, בשל הרגישות והספציפיות שלה, יכולה לקבוע מדגימת דם שנלקחה מוריד:

  • מצב הורמונלי (הורמונים בלוטת התריסובלוטות יותרת הכליה, הורמוני מין);
  • נוכחות של זיהום ויראלי וחיידקי (HIV, B ו-C, כלמידיה, עגבת, וכן, כמו גם מחלות רבות אחרות הנגרמות על ידי מיקרואורגניזמים פתוגניים);
  • עקבות של פעילות חיונית של מיקרואורגניזמים תהליך זיהומי, שהסתיים בהצלחה ועבר לשלב היווצרות תגובה חיסונית לפתוגן זה. עקבות כאלה, כלומר נוגדנים, נשארים במקרים רבים במחזור הדם לכל החיים, מה שמגן על אדם מפני הדבקה חוזרת.

מהי המהות של IF?

שיטת האנזים האימונואסאי מאפשרת לקבוע לא רק את נוכחות הפתוגן עצמו (ניתוח איכותי), אלא גם את התוכן הכמותי שלו בסרום הדם של המטופל.

מינון ויראלי או חיידקי משפיע באופן משמעותי על מהלך התהליך הזיהומי ועל תוצאותיו, לכן, לניתוח כמותי תפקיד חשוב באבחון וטיפול במחלות בצורות ובשלבים שונים.

עם זאת, כאשר אנו מכירים מבחני אימונוסורבנט הקשורים לאנזים כשיטת ELISA, אנחנו אפילו לא חושבים על איך היא מצליחה לכסות מגוון כה רחב של מיקרואורגניזמים המאכלסים את הפלנטה שלנו, שרבים מהם מהווים איום ישיר על בריאותם וחיי בני האדם. חיות. העובדה היא של-ELISA אפשרויות רבות (לא תחרותיות ותחרותיות - ישירות ועקיפות), שכל אחת מהן פותרת את הבעיה שלה ובכך מאפשרת חיפוש ממוקד.

כדי לזהות אימונוגלובולינים ממעמד כזה או אחר, נעשה שימוש בלוח פוליסטירן מסורתי עם 96 בארות (טבליות), שבבארותיו מרוכזים חלבונים רקומביננטיים נספגים בשלב המוצק. הנוגדנים או האנטיגנים שנכנסו לבאר עם סרום הדם מוצאים חפץ "מוכר" ויוצרים איתו קומפלקס (AG - AT), אשר מקובע על ידי מצומד האנזים יתבטא כשינוי בצבע הבאר. בעת קריאת התוצאות.

בדיקת אנזים חיסונית מתבצעת על מערכות בדיקה בעלות ספציפיות מסוימת, העשויה במעבדות מיוחדות ומצוידות בכל הרכיבים המגיבים הדרושים. ניתן לבצע מחקרים באמצעות מכונות כביסה ("מכבסים") וקריאה ספקטרופוטומטרים, כאשר רוב העבודה הידנית מעורבת. במכונות אוטומטיות מלאות, שחרור המעבדה מהזלפה מונוטונית, כביסה ומשימות שגרתיות אחרות, כמובן, זה מהיר ונוח יותר לעבוד, אבל לא כל המעבדות יכולות להרשות לעצמן מותרות שכזה ולהמשיך לעבוד בדרך הישנה - במכשירים חצי אוטומטיים.

הפרשנות של תוצאות ELISA היא באחריות הרופא אבחון מעבדה, בעוד שהתכונה הטבועה כמעט בכל התגובות האימונוכימיות לתת תשובות חיוביות שגויות או שווא-שליליות נלקחת בהכרח בחשבון.

וידאו: בדיקת אנזים אימונו מודרנית

תוצאות ELISA על הדוגמה של עגבת

ELISA מתאים לזיהוי של כל הצורות, ובנוסף, הוא משמש במחקרי מיון. לניתוח, נעשה שימוש בדם ורידי של המטופל שנלקח על בטן ריקה. בעבודה, צלחות עם ספציפיות מסוימת (AT class A, M, G) או סך נוגדנים משמשים.

בהתחשב בכך שנוגדנים בעגבת מיוצרים ברצף מסוים, ELISA יכולה לענות בקלות על השאלה מתי התרחש הזיהום ובאיזה שלב התהליך, וניתן להציג את פענוח התוצאות המתקבלות בצורה הבאה:

  • IgM מציין את משך התהליך הזיהומי (עשוי להופיע במהלך החמרה של מחלות דלקתיות כרוניות);
  • IgA קובע כי הזיהום אירע לפני יותר מחודש;
  • IgG מצביע על כך שהזיהום נמצא בעיצומו או טיפול אחרון, אשר מתגלה בקלות בעת איסוף אנמנזה.

בעת בדיקת עגבת, הבארות השליליות (והביקורת השלילית) יישארו חסרות צבע, בעוד שהחיוביות (כמו הביקורת החיובית) יראו צבע צהוב עז עקב שינוי הצבע של הכרומוגן שנוסף במהלך הבדיקה. עם זאת, עוצמת הצבע לא תמיד תואמת את הבקרה, כלומר, הוא עשוי להיות מעט חיוור יותר או מעט צהבהב. מדובר בתוצאות מפוקפקות, אשר, ככלל, כפופות לבדיקה חוזרת תוך התחשבות חובה במדדים הכמותיים המתקבלים בספקטרופוטומטר, אך באופן כללי, הצבע עומד ביחס ישר למספר הקומפלקסים החיסונים (אנטיגנים ונוגדנים מקושרים אחד לשני).

המרגש ביותר מבין מבחני החיסון האנזימים - ELISA עבור HIV

ניתוח על, אולי יותר מאחרים, מעניין מגוון רחב של האוכלוסייה, כי עדיין לא ניתן לומר בוודאות שרבים בעיות חברתיות(זנות, התמכרות לסמים וכו'). למרבה הצער, HIV משפיע לא רק על חלקים אלה של החברה האנושית, אתה יכול להידבק בנסיבות שונות שאינן קשורות להפקרות מינית או לשימוש בסמים. אבל אם יש צורך בבדיקת HIV, אז אתה לא צריך לפחד שכולם מסביב יגלו על ביקור במעבדה כזו. כעת אנשים שנדבקו ב-HIV מוגנים על פי חוק, ומי שיש לו ספקות יכול לפנות למשרדים אנונימיים שבהם הם יכולים לפתור את הבעיה ללא חשש מפרסום וגינוי.

בדיקת האנזים החיסונית המשמשת לאבחון זיהום ב-HIV הוא אחד המחקרים הסטנדרטיים העיקריים, אשר, עם זאת, דורשים תנאים מיוחדים, שכן הנושא רגיש מאוד.

הגיוני לבצע ELISA ל-HIV לאחר מגע מיני, עירוי דם, הליכים רפואיים אחרים הכרוכים בזיהום ובתום תקופת הדגירה ("חלון סרונטיבי"), אך יש לזכור כי פרק זמן זה אינו קבוע. זה יכול להסתיים תוך 14-30 ימים, או שזה יכול להימשך עד שישה חודשים, כך שהערך הממוצע נחשב למרווח בין 45 ל-90 ימים. דם נתרם עבור HIV באותו אופן כמו עבור זיהומים אחרים - מוריד על קיבה ריקה. התוצאות יהיו מוכנות בהתאם להצטברות החומר במעבדה ועומס העבודה שלו (בין יומיים ל-10 ימים), אם כי רוב המעבדות נותנות מענה באותו היום או למחרת.

מה ניתן לצפות מתוצאות HIV?

ELISA לזיהום ב-HIV מזהה נוגדנים לשני סוגים של הנגיף: HIV-1 (נפוץ יותר ברוסיה ובמדינות אחרות באירופה ובאסיה) ו-HIV-2 (נפוץ יותר במערב אפריקה).

המשימה של HIV ELISA היא לחפש נוגדנים מסוג G, המתגלים בכל מערכות הבדיקה, אך בתקופה מאוחרת יותר, ונוגדנים מסוג A ו-M, המזוהים בערכות בדיקה רקומביננטיות מהדור החדש, המאפשרות לזהות נוגדנים על הכי שלבים מוקדמים(תקופת דגירה - "חלון סרונגיטיבי"). ניתן לצפות לתשובות הבאות מ-ELISA:

  1. תוצאה חיובית ראשונית: הדם כפוף לבדיקה חוזרת במערכת בדיקה מאותו סוג, אך, אם אפשר, מסדרה אחרת ועל ידי אדם אחר (עוזר מעבדה);
  2. חוזר (+) כולל דגימת דם חדשה ממטופל עם מחקר שלה בדומה לניתוח הראשוני;
  3. התוצאה החיובית הבאה כפופה לניתוח התייחסות, המשתמש בערכות בדיקה ספציפיות ביותר (2-3 יח');
  4. תוצאה חיובית בשתי המערכות (או שלוש) נשלחת לאימונובלוטינג (אותה ELISA, אך מבוצעת בנפרד על ערכות בדיקה בעלות סגוליות גבוהה במיוחד).

המסקנה לגבי הדבקה ב-HIV נעשית רק על בסיס אימונובלוטינג. שיחה עם האדם הנגוע מתנהלת בסודיות מוחלטת. חשיפת סודות רפואיים ברוסיה, כמו גם במדינות אחרות, כפופה לענישה פלילית.

ניתוחים לכלמידיה וציטומגלווירוס על ידי בדיקת אנזים אימונו זכו אף הם לפופולריות מיוחדת, בשל העובדה שהם מאפשרים לקבוע את זמן ההדבקה, את שלב המחלה ואת היעילות של אמצעים טיפוליים.

במהלך ההקדמה, ניתן גם לצפות בהופעת נוגדנים ממעמדות שונים.בשלבים שונים מצב פתולוגינגרם על ידי גורם זיהומי:

  • ניתן לזהות IgM כבר שבעה ימים לאחר ההדבקה;
  • IgA מצביע על כך שהזיהום חי בגוף יותר מחודש;
  • IgG מאשרת את האבחנה של כלמידיה, עוזרת לעקוב אחר הטיפול ולקבוע את יעילותו. יש לציין כי נוגדנים מסוג G נשארים ומסתובבים בגוף ללא קשר למשך המחלה, לכן, לפירוש נכון של הניתוח, יש לקחת בחשבון ערכי ייחוס (נורמות), אשר על ידי הדרך, שונה עבור כל CDL: תוך התחשבות במותג של מערכת הבדיקה ובספציפיות של הריאגנטים הכלולים בסט. ערכי הנורמה מוזנים בטופס ליד תוצאת ELISA.

לגבי, כאן זה קצת שונה:נוגדנים מסוג M מופיעים בעוד כחודש וחצי, כלומר, תוצאה חיובית (IgM+) הופכת בשלב של זיהום ראשוני או במהלך הפעלה מחדש של זיהום סמוי ונשארת כזו בין 4 חודשים לשישה חודשים.

נוכחותם של נוגדנים מסוג G אופיינית להתפרצות של זיהום חריף ראשוני או זיהום חוזר. הניתוח קובע כי הנגיף קיים, אך אינו מספק מידע על שלב התהליך הזיהומי. בינתיים, קביעת נורמת הטיטר של IgG גם גורמת לקשיים, שכן היא תלויה לחלוטין במצב החיסוני של אדם מסוים, אשר, עם זאת, נקבע על ידי זיהוי של אימונוגלובולינים מסוג G. בהתחשב בהתנהגות זו של נוגדנים, באבחון של CMVI, יש צורך להעריך את יכולתם של נוגדנים מסוג G ליצור אינטראקציה עם CMV, על מנת "לנטרל" אותו מאוחר יותר (AT avidity). בשלב הראשוני של המחלה, IgG נקשר בצורה גרועה מאוד לאנטיגנים של הנגיף (תשוקה נמוכה) ורק אז הם מתחילים להראות פעילות, לכן, ניתן לדבר על עלייה בתשוקה של נוגדנים.

אנחנו יכולים לדבר על היתרונות של אנזים immunoassay במשך זמן רב, כי שיטה זו הצליחה לפתור בעיות אבחון רבות באמצעות דם ורידי בלבד. אין צורך בהמתנה ארוכה, בדאגות ובבעיות בנטילת חומר למחקר. בנוסף, מערכות הבדיקה ל-ELISA ממשיכות להשתפר והיום בו הבדיקה תיתן אמינות של 100% התוצאה לא רחוק.

וידאו: סרט חינוכי של אוניברסיטת מוסקבה לרפואה. Sechenov על היסודות של ELISA

אבחון בזמן של זיהום HIV הופך למדד חשוב ביותר, שכן טיפול מוקדם יותר יכול לקבוע במידה רבה את המשך התפתחות המחלה ולהאריך את חיי המטופל. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בתחום גילוי המחלה הנוראה הזו: מערכות הבדיקה הישנות מוחלפות במתקדמות יותר, שיטות הבדיקה נעשות נגישות יותר ודיוקן עולה משמעותית.

במאמר זה, נדבר על שיטות מודרניותאבחון של זיהום HIV, אשר שימושי לדעת לטיפול בזמן בבעיה זו ושמירה על איכות החיים התקינה של המטופל.

שיטות לאבחון HIV

ברוסיה, לאבחון של זיהום ב-HIV, הליך סטנדרטיהכולל שתי רמות:

  • מערכת בדיקת ELISA (ניתוח סקר);
  • סופג חיסון (IB).

ניתן להשתמש גם בשיטות אבחון אחרות:

  • מבחנים אקספרס.

מערכות בדיקת ELISA

בשלב הראשון של האבחון, בדיקת סקר (ELISA) משמשת לאיתור זיהום ב-HIV, המבוססת על חלבוני HIV שנוצרים במעבדות הלוכדות נוגדנים ספציפיים המיוצרים בגוף בתגובה לזיהום. לאחר האינטראקציה שלהם עם הריאגנטים (אנזימים) של מערכת הבדיקה, צבע המחוון משתנה. יתר על כן, שינויי צבע אלה מעובדים בציוד מיוחד, הקובע את תוצאת הניתוח שבוצע.

בדיקות ELISA כאלה מסוגלות להראות תוצאות תוך מספר שבועות לאחר כניסת זיהום HIV. ניתוח זה אינו קובע את נוכחות הנגיף, אלא מזהה ייצור של נוגדנים אליו. לעיתים, בגוף האדם, ייצור הנוגדנים ל-HIV מתחיל לאחר שבועיים לאחר ההדבקה, אך אצל רוב האנשים הם מיוצרים במועד מאוחר יותר, לאחר 3-6 שבועות.

ישנם ארבעה דורות של בדיקות ELISA עם רגישויות שונות. בשנים האחרונות נעשה שימוש תכוף יותר במערכות בדיקה מדור III ו-IV, המבוססות על פפטידים סינתטיים או חלבונים רקומביננטיים ובעלות ספציפיות ודיוק גבוהים יותר. ניתן להשתמש בהם כדי לאבחן זיהום ב-HIV, לנטר את שכיחות ה-HIV ולהבטיח בטיחות בעת בדיקת דם שנתרם. הדיוק של מערכות בדיקת ELISA דורות III ו-IV הוא 93-99% (רגישות יותר הן הבדיקות שמיוצרות במערב אירופה - 99%).

לביצוע בדיקת ELISA נלקחים 5 מ"ל דם מהוריד המטופל. בין הארוחה האחרונה לניתוח צריך להיות לפחות 8 שעות (ככלל, זה מבוצע בבוקר על בטן ריקה). בדיקה כזו מומלץ לבצע לא לפני 3 שבועות לאחר ההדבקה לכאורה (לדוגמה, לאחר קיום יחסי מין לא מוגנים עם בן זוג חדש).

תוצאות בדיקת ELISA מתקבלות לאחר 2-10 ימים:

  • תוצאה שלילית: מעידה על היעדר זיהום ב-HIV ואינה דורשת הפניה למומחה;
  • תוצאה שלילית שגויה: ניתן להבחין בשלבים המוקדמים של הזיהום (עד 3 שבועות), בשלבים המאוחרים יותר של איידס עם דיכוי חיסוני חמור ועם הכנת דם לא נכונה;
  • תוצאה חיובית שגויה: ניתן להבחין בה במחלות מסוימות ובמקרה של הכנת דם לא נכונה;
  • תוצאה חיובית: מעידה על זיהום זיהום ב-HIV, דורש IB והפניית המטופל למומחה במרכז לאיידס.

מדוע בדיקת ELISA יכולה לתת תוצאות חיוביות שגויות?

ניתן לראות תוצאות חיוביות שגויות של בדיקת ELISA ל-HIV עם עיבוד לא תקין של דם או בחולים עם מצבים ומחלות כאלה:

  • מיאלומה נפוצה;
  • מחלות זיהומיות שנגרמו על ידי נגיף אפשטיין-בר;
  • מדינה אחרי;
  • מחלות אוטואימוניות;
  • על רקע הריון;
  • מצב לאחר חיסון.

מהסיבות שתוארו לעיל, נוגדנים לא ספציפיים בעלי תגובה צולבת עשויים להיות נוכחים בדם, שייצורם לא עורר על ידי זיהום HIV.

בשנים האחרונות ירדה באופן משמעותי תדירות התוצאות החיוביות הכוזבות עקב שימוש במערכות בדיקות מדור III ו-IV, המכילות פפטיד וחלבונים רקומביננטיים רגישים יותר (הם מסונתזים באמצעות הנדסה גנטית חוץ גופית). לאחר השימוש בבדיקות ELISA כאלה, שכיחות התוצאות החיוביות השגויות ירדה משמעותית והיא כ-0.02-0.5%.

תוצאה חיובית כוזבת אינה אומרת שאדם נגוע ב-HIV. במקרים כאלה, ארגון הבריאות העולמי ממליץ על בדיקת ELISA נוספת (דור IV חובה).

הדם של המטופל נשלח למעבדת התייחסות או בוררות המסומנת "חזרה" ונבדק על מערכת בדיקת ELISA דור IV. אם התוצאה של הניתוח החדש שלילית, אז התוצאה הראשונה מזוהה כשגויה (חיובי שגוי) ו-IB לא מבוצע. אם התוצאה חיובית או מפוקפקת במהלך הבדיקה השנייה, המטופל נדרש לעבור IB תוך 4-6 שבועות כדי לאשר או להפריך זיהום ב-HIV.

סיכה חיסונית

ניתן לקבוע את האבחנה הסופית של זיהום ב-HIV רק לאחר קבלת תוצאה חיובית. סיכה חיסונית(IB). ליישומו, נעשה שימוש ברצועת ניטרוצלולוזה, עליה מורחים חלבונים ויראליים.

דגימת דם ל-IB מתבצעת מוריד. לאחר מכן הוא עובר טיפול מיוחד והחלבונים הכלולים בסרום שלו מופרדים בג'ל מיוחד לפי מטען ומשקלם המולקולרי (המניפולציה מתבצעת בציוד מיוחד בהשפעת שדה חשמלי). רצועת ניטרוצלולוזה מונחת על הג'ל בסרום הדם והספיגה ("ספיגה") מתבצעת בתא מיוחד. הרצועה עוברת עיבוד ואם החומרים המשמשים מכילים נוגדנים ל-HIV, הם נקשרים לרצועות האנטיגניות ב-IB ומופיעים כקווים.

IB נחשב חיובי אם:

  • על פי קריטריונים של CDC אמריקאי - יש שתיים או שלוש שורות gp41, p24, gp120 / gp160 על הרצועה;
  • לפי קריטריונים של ה-FDA האמריקאי - יש שני קווים p24, p31 וקו gp41 או gp120 / gp160 על הרצועה.

ב-99.9% מהמקרים, תוצאה חיובית של IB מצביעה על זיהום ב-HIV.

בהיעדר שורות - IB הוא שלילי.

כאשר מזהים קווים עם gp160, gp120 ו-gp41, IB מוטל בספק. ניתן לזהות תוצאה כזו כאשר:

  • מחלות אונקולוגיות;
  • הֵרָיוֹן;
  • עירויי דם תכופים.

במקרים כאלה, מומלץ לבצע מחקר שני באמצעות ערכה של חברה אחרת. אם לאחר IB נוסף, התוצאה נותרת בספק, אזי יש צורך במעקב במשך שישה חודשים (IB מתבצע כל 3 חודשים).

תגובת שרשרת פולימראז

בדיקת PCR יכולה לזהות את ה-RNA של הנגיף. הרגישות שלו די גבוהה והוא מאפשר לזהות זיהום ב-HIV כבר 10 ימים לאחר ההדבקה. במקרים מסוימים, PCR יכול לתת תוצאות חיוביות שגויות, מכיוון שהרגישות הגבוהה שלו יכולה להגיב גם לנוגדנים לזיהומים אחרים.

טכניקת אבחון זו יקרה, דורשת ציוד מיוחד ומומחים מוסמכים ביותר. סיבות אלו אינן מאפשרות לבצע אותה במהלך בדיקות המוניות של האוכלוסייה.

PCR משמש במקרים כאלה:

  • לגלות HIV בילודים שנולדו לאמהות נגועות ב-HIV;
  • לגלות HIV ב"תקופת החלון" או במקרה של ספק IB;
  • לשלוט בריכוז HIV בדם;
  • לחקר דם תורם.

רק על ידי בדיקת PCR, האבחנה של HIV אינה מתבצעת, אלא מתבצעת כשיטת אבחון נוספת ליישוב מחלוקות.


שיטות אקספרס

אחד החידושים באבחון HIV הפך לבדיקות מהירות, שניתן להעריך את תוצאותיהן תוך 10-15 דקות. התוצאות היעילות והמדויקות ביותר מתקבלות בבדיקות אימונוכרומטוגרפיות המבוססות על עקרון הזרימה הנמית. הם רצועות מיוחדות שעליהן מורחים דם או נוזלי בדיקה אחרים (רוק, שתן). בנוכחות נוגדנים ל-HIV, לאחר 10-15 דקות, מופיע פס צבעוני ובקרה בבדיקה - תוצאה חיובית. אם התוצאה שלילית, רק שורת הבקרה מופיעה.

כמו בבדיקות ELISA, יש לאשר את תוצאות הבדיקה המהירות על ידי ניתוח IB. רק אז ניתן לאבחן זיהום ב-HIV.

יש ערכות אקספרס לבדיקה ביתית. בדיקת OraSure Technologies1 (ארה"ב) מאושרת על ידי ה-FDA, זמינה ללא מרשם וניתן להשתמש בה כדי לזהות HIV. לאחר הבדיקה, במקרה של תוצאה חיובית, מומלץ למטופל לעבור בדיקה במרכז מומחה לאישור האבחנה.

שאר הבדיקות לשימוש ביתי טרם אושרו על ידי ה-FDA והתוצאות שלהן עשויות להיות מוטלות בספק רב.

למרות העובדה שבדיקות מהירות נחותות בדייקנות מבדיקות ELISA דור IV, הן נמצאות בשימוש נרחב לבדיקות נוספות של האוכלוסייה.

ניתן להיבדק להידבקות ב-HIV בכל מרפאה, בבית החולים האזורי המרכז או במרכזי איידס מיוחדים. בשטחה של רוסיה, הם מוחזקים בסודיות מוחלטת, או בעילום שם. כל מטופל יכול לצפות לקבל ייעוץ רפואי או פסיכולוגי לפני או אחרי הניתוח. עבור בדיקות HIV תצטרכו לשלם רק במוסדות רפואיים מסחריים, ובמרפאות ציבוריות ובבתי חולים הן מתבצעות ללא תשלום.

למידע על איך אתה יכול להידבק ב-HIV ואיזה מיתוסים קיימים לגבי האפשרויות להידבק, קרא


הבעלים של הפטנט RU 2283497:

ההמצאה מתייחסת לתחום הביוטכנולוגיה והרפואה. מערכת בדיקת אנזים חיסוני לזיהוי ספקטרום הנוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מהסוג הראשון והשני, הסוג הראשון של קבוצה O וזיהוי האנטיגן לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג הראשון p24 כולל סופג חיסוני מבוסס על אנטיגנים של וירוס כשל חיסוני אנושי המייצגים gp41 (env HIV-1 ו-HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), נוגדנים לאנטיגן HIV 1 p24 , וריאגנטים לזיהוי, בעוד שאנטיגנים של HIV ונוגדני HIV הנ"ל נספגים בבארות שונות של צלחות לבדיקת אנזים אימונו, וצלחות מתקפלות או לא מתקפלות של פוליסטירן עם 96 בארות משמשות לספיחה. ההמצאה מספקת רגישות מוגברת, פישוט, הדרה של הסובייקטיביות של הערכת התוצאות. 1 ז.פ. f-ly, 10 tab., 1 ill.

ההמצאה מתייחסת לתחום הביוטכנולוגיה והרפואה. שימוש: זיהוי מובחן של כל סוגי הנוגדנים הספציפיים לחלבונים של נגיף כשל חיסוני אנושי 1 ו-2, אנטיגן HIV 1 קבוצת O ו-HIV 1 p24.

מהות: השגת מערכת בדיקת אנזים אימונו לזיהוי ספקטרום הנוגדנים מכל הקבוצות לחלבונים בודדים ול-HIV 1 ו-2, HIV 1 קבוצת O ו-HIV 1 p24 אנטיגן בסרום הדם (פלזמה), אימונוגלובולינים ומוצרי דם על מנת לזהות ספקטרום הנוגדנים ל-HIV 1 ו-2, ל-HIV 1 קבוצת O, זיהוי של אנטיגן HIV 1 p24, ואישור של תוצאות סקר חיוביות או בלתי מוגדרות לנוגדנים ל-HIV 1 ו-2, ל-HIV 1 מקבוצת O ולאנטיגן HIV 1 p24.

תיאור ההמצאה

אבחון מעבדה של זיהום ב-HIV מבוסס על שלושה תחומים: א) אינדיקציה ל-HIV ומרכיביו; ב) איתור נוגדנים ל-HIV; ג) קביעת שינויים במערכת החיסון. בין השיטות הקיימות לאבחון מעבדה, שיטות סרולוגיות הן הנפוצות ביותר - זיהוי נוגדנים לאנטיגנים של וירוסים.

כדי לזהות נוגדנים בהידבקות ב-HIV, נעשה שימוש בעיקר בבדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA) ואימונובלוטינג (IB). ELISA מבוססת על אימוביליזציה של אנטיגנים ויראליים על גבי לוחות, הקושרים את הנוגדנים של המטופל, והתסביך של אנטיגן-נוגדנים מתגלה באמצעות נוגדנים חד שבטיים של עכבר מצומדים חזרת פרוקסידאז לאימונוגלובולינים אנושיים G ו-M. השיטה די ספציפית ורגישה ומאפשרת לזהות נוגדנים ספציפיים לווירוס ב-95% מהחולים. 5% המקרים הנותרים מתרחשים בשלבים המוקדמים של ההדבקה, כאשר עדיין יש מעט נוגדנים בסרום הדם, או בשלבים הסופניים של המחלה, כאשר הגוף אינו מסוגל עוד לסנתז נוגדנים עקב דלדול חד. מערכת החיסון. אפשריות גם תוצאות ELISA חיוביות כוזבות, בעיקר בחולים עם מחלות אוטואימוניות ואונקולוגיות, וכן בזיהומים הנגרמים על ידי נגיף אשפטין-בר. במקרה זה, תגובה צולבת של נוגדנים לגורם שגרוני, לנגיף אפשטיין-בר או לקובעים אנטיגנים הדומים לחלבונים של תסביך ההיסטו-תאימות העיקריים מסוג 1 ו-2 (HLA-4 ו-DQW3) ובעלי יכולת להיקשר לאנטיגנים של HIV מתרחשת. תוצאות חיוביות כוזבות נראות לעתים קרובות בנשים בהריון ובקשישים. המוליזה, ליפמיה, זיהום חיידקי של סרה יכולים להיות גם הגורמים לתוצאות לא אמינות.

בהקשר זה, הוצעו ושימשו מספר שיטות לבדיקת הספציפיות של תוצאות גילוי נוגדנים. מבין השיטות הללו, התגובה הנפוצה ביותר היא "כתם חיסון" בשינוי של "כתם מערבי". מהות השיטה היא כדלקמן: בשלב הראשון, חלבוני HIV מופרדים לפי משקל מולקולרי באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד. לאחר מכן, העברה אלקטרופורטית מג'ל הפוליאקרילאמיד אל פני השטח של קרום הניטרוצלולוזה. האנטיגנים המועברים בדרך זו מזוהים על הממברנה באמצעות ניתוח עקיף: הממברנה מודגרת עם חומר הבדיקה; נוגדנים שהכילו נקשרים לאנטיגנים של HIV המועברים לממברנת ניטרוצלולוזה, ואז מודגרות רצועות הממברנה עם המצומד; כאשר נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, הצמוד נצמד אליו, לאחר שטיפה מהמצומד והדגירה עם המצע, מתרחשת צביעה של אותם חלקים של ניטרוצלולוזה במקום בו מתרחשת היווצרות קומפלקס אנטיגן-נוגדן-מצומד. הציור מציג דוגמאות לתוצאות חיוביות, חלשות חיוביות ושליליות של אימונובלוט.

בסרום של אנשים שנדבקו ב-HIV-1 וב-HIV-2, נמצאים נוגדנים לחלבונים הבאים (p) ולגליקופרוטאינים (gp): טבלה א'.

טבלה ב' מציגה את הקריטריונים להערכת תוצאות הספיגה החיסונית המומלצת על ידי WHO והמרכז הרוסי למניעה ובקרה של איידס.

בהתבסס על הקריטריונים של WHO, סמים נחשבים חיוביים אם מתגלים נוגדנים לשני חלבוני מעטפת HIV-1 כלשהם בשיטת IB. אם יש תגובה עם אחד מחלבוני המעטפת בלבד (gp160, gp120, gp41), בשילוב עם תגובה עם חלבונים אחרים או בלעדיו, התוצאה נחשבת בספק. על פי המרכז המדעי והמתודולוגי הפדרלי של משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית למניעה ובקרה של איידס, ניתן לפרש סרה כחיובית גם בנוכחות נוגדנים לחלבון שכבה אחד בלבד.

גילוי נוגדנים לאנטיגן p24 עשוי להעיד על תקופת תחילת ההמרה הסרוקית, שכן נוגדנים לחלבון זה מופיעים ראשונים. תגובות חיוביות עם חלבוני gag ו-pol ללא תגובה עם חלבוני env עשויות לשקף את השלב של המרה סרוקית מוקדמת, כמו גם להצביע על נוכחות של זיהום HIV-2 או תגובה לא ספציפית.

לשימוש באימונובלוטינג כשיטה מומחית לאבחון HIV יש מספר חסרונות משמעותיים:

1. חוסר האפשרות לאשר את גילוי האנטיגן p24 של HIV 1 במקרה של שימוש בבדיקות הקובעות בו-זמנית את האנטיגן והנוגדנים ל-HIV, מה שהופך את זה לא מתאים (ללא משמעות) להשתמש בבדיקות סקר לגילוי בו זמנית של אנטיגן ונוגדנים ל-HIV (צו של משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית מס' 292 מיום 30.07. 2001: "לבדיקת תורמים בתחנות עירוי דם, יש צורך להשתמש במערכות בדיקה המאתרות גם אנטיגן וגם נוגדנים ל-HIV").

2. איתור נוגדנים בלבד ממחלקת IgG. אי אפשר לאשר באופן מלא את התוצאות החיוביות שהתקבלו באמצעות בדיקות של דור 3 ו-4 (זיהוי נוגדני IgG ו-IgM).

3. הסובייקטיביות של פירוש ציון המבחן, במיוחד במקרים של תוצאות "מוטלות בספק" ו"לא ודאות" ובשלבים ראשוניים של המרה סרוקית (הרצועות הניתנות לזיהוי על ממברנות ניטרוצלולוזה במקרים אלו מטושטשות, בקושי נראות לעין בלתי מזוינת. , ולעתים קרובות יש חילוקי דעות כאשר הם מוערכים על ידי אנשים שונים).

4. חוסר האפשרות של הערכה כמותית אוטומטית של תוצאות הניתוח.

5. רגישות נמוכה יותר בהשוואה ל-ELISA.

6. שבירות של אחסון (במהלך האחסון, רצועות של קרום ניטרוצלולוזה דוהות ואינן יכולות להוות אישור אובייקטיבי לגילוי או אי גילוי של HIV במקרים שנויים במחלוקת).

7. קושי בהגדרת התגובה והאחסון (רצועות קרום ניטרוצלולוזה שבריריות מאוד ולעיתים נשברות).

8. עלות גבוהה של ערכות IS.

מגיב ידוע, שהוא ערכה לקביעה בו-זמנית של אנטיגנים ונוגדנים לאותו פתוגן, כולל HIV (DE 4236189 F1, 28.04.1994). עם זאת, לא נחשפת מערכת בדיקות המאפשרת לאבחן זיהום ב-HIV בשלבים שונים.

מטרת ההמצאה הנוכחית היא להשיג מערכת בדיקה שבאמצעותה ניתן לאשר תוצאות חיוביות או מפוקפקות של בדיקות סקר לאיתור נוגדנים ל-HIV 1 ו-2, HIV 1 group O ו-HIV 1 p24 אנטיגן באמצעות בדיקות לאיתור בו-זמני של אנטיגנים ונוגדנים.

הפתרון הטכני המוצע מושג על ידי מערכת בדיקת אנזים חיסונית לזיהוי ספקטרום הנוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מהסוג הראשון והשני, הסוג הראשון של קבוצה O וזיהוי אנטיגן p24 לנגיף הכשל החיסוני האנושי. מהסוג הראשון p24, המאופיין בכך שהוא כולל חומר חיסוני המבוסס על אנטיגנים נגיף כשל חיסוני אנושי, שהם gp41 (env HIV-1 ו-HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), נוגדנים לאנטיגן HIV 1 p24, וריאגנטים לזיהוי, שבהם אנטיגנים של HIV ונוגדני HIV הנ"ל נספגים בבארות שונות של צלחות לבדיקת אנזים אימונו.

בנוסף, צלחות מתקפלות או לא מתקפלות של פוליסטירן עם 96 בארים לבדיקת אנזים חיסונית משמשות לספיחה.

התוצאה הטכנית שהושגה על ידי ההמצאה הנוכחית היא האפשרות לאשר תוצאות חיוביות לנוגדנים ל-HIV 1 ו-2, אנטיגן HIV 1 קבוצת O ו-HIV 1 p24, רגישות גבוהה, אפשרות לפרשנות אוטומטית של התוצאות, מה שמבטל את הסובייקטיביות של ההערכה, קלות ביצוע הבדיקה, פחות מאשר עם ערכות IS העלות הקיימות.

פתרון טכני זה שונה מהידועים:

1. השתמש כצלחת נשא פאזה מוצקה לתגובות אימונולוגיות.

2. שימוש בו-זמני בנוגדנים ל-p 24 HIV ובסט של אנטיגנים ל-HIV כחומר ספיגה.

ההמצאה מומחשת על ידי הדוגמה הבאה.

העיקרון הפעיל של מערכת הבדיקות שפותחה "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" הם:

אימונוסורבנט - אנטיגנים רקומביננטיים הדומים לחלבונים מבניים של HIV-1: gp41 (env HIV-1 ו-HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) ומונוקלונלי נוגדני עכברים לאנטיגן HIV 1(p24) נספגים בנפרד על רצועות של צלחת מתקפלת מפוליסטירן.

להכנת שימוש בחומר חיסוני:

1. HIV-1 gp41 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 109.

3. HIV-1 p24 - חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 105.

4. HIV-1 p31 - חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 108.

5. HIV-2 p36 - חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 106.

מצומד 1, ליאופיל או נוזלי, נוגדנים חד שבטיים של עכבר לאנטיגן HIV1 p24, מצומד עם ביוטין.

1. מצומד 2, ליאופיל או נוזלי, תערובת של אנטיגנים רקומביננטיים הדומים לחלבונים המבניים של HIV-1: gp41 (env HIV-1 ו-HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1 ); HIV-2: gp36 (env) מצומד עם ביוטין;

2. מצומדים 3, 4 - lyophilized או נוזלי - streptavidin המסומן עם חזרת peroxidase;

במהלך מחקרים מקדימים, נבחר תכנון מערכת הבדיקה, נבנה הטכנולוגיה להכנת מרכיביה ואופטימיזציה של התנאים לביצוע בדיקת האנזים החיסונית.

בעת הגדרת ELISA במערכת הבדיקה "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1", מוסיפים 25 μl של conjugate-1 לבורות הצלחת עם נוגדנים נספגים ל-p24, ולתוך הבארות עם אנטיגנים נספגים - 25 μl conjugate-2. ערכת התגובה מוצגת להלן. לאחר מכן, 25 μl של דגימת הבדיקה מתווספים לכל באר. במקביל, בבארות עם אנטיגנים, הצבע משתנה מכתום לורוד, ובבאר עם נוגדנים, מירוק לאפור. התערובת מודגרת במשך 45 דקות ב-37 מעלות צלזיוס על שייקר (או שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס בתרמוסטט). לאחר מכן, ללא שטיפה, מוסיפים 50 μl של conjugate-3 לבארות הטבליה לקביעת אנטיגן p24, ו-50 μl של conjugate-4 מתווספים לבארות לקביעת נוגדנים. לאחר דגירה של 20 דקות ב-37 מעלות צלזיוס על שייקר (או 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס בתרמוסטט), הצלחת נשטפת ומפותחת עם תערובת המצע. זמן תגובה כולל שעה 25 דקות (או שעה 50 דקות). האנטיגן p24 הקיים בדגימת הבדיקה נקשר לנוגדנים חד שבטיים ל-p24, ונוגדנים ספציפיים יוצרים קומפלקס עם אנטיגנים רקומביננטיים על הצלחת. הקומפלקס החיסוני המתקבל אנטי-p24 עם p24 מזוהה עם מצומדים אנטי-p24-ביוטין, לאחר מכן עם סטרפטאווידין-פרוקסידאז, והקומפלקסים החיסונים של Ag-HIV עם At-HIV מתגלים עם מצומדות Ag-biotin, ולאחר מכן עם סטרפטאבידין-פרוקסידאז. .

תוכנית הגדרת התגובה.

ההתחשבנות בתוצאות מתבצעת באופן ספקטרופוטומטרי בשני אורכי גל: 450 /620-680 ננומטר כשהמכשיר מוגדר ל"אוויר". הבה ניקח בחשבון את התוצאות באורך גל אחד של 450 ננומטר.

תוצאות הניתוח נלקחות בחשבון אם הערכים הממוצעים של צפיפות אופטית (OD) בבארות עם K- אינם גבוהים מ-0.2, בבארות עם K+- לא פחות מ-1.0. ביקורת OP. מחושב לפי הנוסחה:

ביקורת OP. gp41 = cf. ערך OP K-(gp41)+0.15

ביקורת OP. gp120 = cf. ערך OP K-(gp120)+0.15

ביקורת OP. p24 = cf. ערך OP K-(р24)+0.15

ביקורת OP. p31 = cf. ערך OP K-(р31)+0.15

ביקורת OP. gp36 = cf. ערך OP K-(gp36)+0.15

ביקורת OP. Ag p24 = cf. ערך OD ל- (Ag p24)+0.04

כאשר 0.15 ו-0.04 הם מקדמים שנקבעו בשיטת העיבוד הסטטיסטי אצל היצרן. בתהליך הפיתוח של מערכת הבדיקה, נעשה שימוש בדברים הבאים:

1. דגימות סרום דם מתורמים בריאים (n=610).

2. דגימות סרום דם מחולים עם מחלות זיהומיות שונות שאינן קשורות ל-HIV (ARI, דלקת ריאות, דלקת שקדים, זיהומים הרפטיים וציטומגלווירוסים, עגבת, כלמידיה, צהבת נגיפית A, B ו-C (n=224)).

3. דגימות סרום דם של חולים במחלות שונות שאינן מדבקות - פציעות, מחלות של מערכת הלב וכלי הדם, אונקולוגיה (n=35).

4. דגימות סרום דם של נשים בהריון (n=40).

5. דגימות סרום דם, סרו-חיוביות ב-ELISA ואושרו באימונובלוט (n=428).

6. דגימות נסיוב עם תוצאה חיובית שהתקבלה במערכות בדיקת אנזימים חימוניים לקביעה בו-זמנית של נוגדני HIV 1,2 ואנטיגן p24, ותוצאת אימונובלוט בלתי מוגדרת (n=123).

7. פאנל פנימי של סרה המכילים נוגדנים ל-HIV 1.2 ולא מכילים נוגדנים, נבדק בבדיקות חיסוניות אנזימים הרשומים על ידי משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית ואימונובלוט (n=21).

8. תקן "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", צרפת, חתול. מס' 72217, שהוא אנטיגן המתקבל מ-lysate ויראלי.

9. הסטנדרט הפנימי של המיזם. דגימה המכילה אנטיגן p 24 בריכוז של 200 pg/ml, מתקבלת מ-lysate ויראלית ומעוטרת לפי חברת "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" "BIO RAD", צרפת, קט. מס' 72217.

10. פאנל סטנדרטי של סרה המכילים נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג הראשון (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, Medico-Biological Union, נובוסיבירסק.

11. פאנל סטנדרטי של סרה המכילים נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג השני (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, Medico-Biological Union, נובוסיבירסק.

12. פאנל סרמים סטנדרטי שאינם מכילים נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג הראשון והשני (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, Medico-Biological Union, נובוסיבירסק.

הערכת הרגישות של מערכת הבדיקה לאיתור האנטיגן p24 בוצעה באמצעות התקן "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", התקן הפנימי של הארגון. באמצעות התקן הפנימי, הוכנו 4 דילולים רצופים של פי 2 מ-40 pg/mL ל-5 pg/mL עם פלזמה רגילה של תורם ללא נוגדנים ל-HIV 1, 2 כמדלל. הכמות הקטנה ביותר של אנטיגן שניתן לזהות נלקחה כקריטריון רגישות. הנתונים שהתקבלו מוצגים בטבלה 1.

כדי להעריך את הרגישות של מערכת הבדיקה לאיתור נוגדנים ספציפיים, נעשה שימוש בפאנלים סטנדרטיים של דגימות המכילות נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-28-216- 02P (HIV 2) p.003).

הנתונים שהתקבלו מוצגים בטבלאות 3, 4.


יעילות האבחון של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" הושווה למערכות הבדיקה "Jenscrin-HIV-Ag/Am" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). לצורך כך נבדקו דגימות סרום מהפאנל הפנימי בכל הבדיקות המצוינות. התוצאות המוצגות בטבלה 5 מצביעות על יעילות האבחון הגבוהה של "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1".

מחקרי רגישות של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" בוצעו גם עם סרחי הדם של חולים שאושרו באימונובלוט כחיובי HIV. בסך הכל נבדקו 428 דגימות של סמים אלה. התקבלו מספר אפשרויות לאיתור נוגדנים לחלבוני HIV שונים ולאנטיגן p24. התוצאות מוצגות בטבלה 6.

טבלה 6

התוצאות של גילוי נוגדנים לחלבוני HIV 1 שונים ולאנטיגן p24 בעת בדיקת סרה חיובית ל-HIV 1 (n=428)
% איתורפרופיל חלבון
  אנטי-gr41anti-gr120anti-r24anti-r31עמ' 24
51,1% + + + + -
35,3% + - + + -
4% + - + - -
3,3% + - - + -
1,4% + - - + +
1,2% + + + + +
1,2% + + - + +
0,9% + - + + +
0,7% + - + - +
0,5% + - - - +
0,2% + + - - +
0,2% + + - - -
% זיהוי של נוגדנים לחלבונים בודדים או Ag p24100% 53,9% 93,2% 94,4% 6,1%

בעת בדיקת דגימות חיוביות ל-HIV 1, 3% מהסרום הראו תגובה חיובית עם gp36 (env HIV 2). MP/OPcrit בדגימות אלו לא עלה על 2.0. הנתונים שלנו על תגובתיות צולבת של חלבוני המעטפת החיצונית של HIV 1 (gp41) ו-HIV 2 (gp36) תואמים את נתוני הספרות.

פרשנות של תוצאות

ניתוח בדיקת סרמים חיוביים ל-HIV ודגימות מפאנלים סטנדרטיים ופנימיים ב-"DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" אפשרו לפתח קריטריונים לפירוש תוצאות בדיקה זו. קריטריונים מומלצים מוצגים בטבלה 7.

בהתבסס על קריטריונים אלו, כל דגימות הסרה החיוביות ל-HIV (n=428) זוהו כחיוביות ב-"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1". מתוך 16 הדגימות של הפאנל הסטנדרטי המכילות נוגדנים ל-HIV 1, 14 נקבעו כחיוביות ו-2 כבלתי מוגדרות. כל 8 הדגימות מהפאנל הסטנדרטי המכילות נוגדנים ל-HIV 2 נקבעו כחיוביות. מתוך 10 הדגימות מהפאנל הפנימי המכילות נוגדנים ל-HIV 1, 7 זוהו כחיוביות ו-3 כבלתי מוגדרות.

מחקרי רגישות של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" בוצעו גם עם סרחי דם של מטופלים עם תוצאה חיובית במערכות בדיקת אנזים אימונואסאי המאתרות בו זמנית נוגדנים ואנטיגן p24, ובלתי מוגדר באימונובלוט . בסך הכל נבדקו 123 דגימות כאלה. הנתונים מוצגים בטבלה 8.



בעת בדיקת סמים עם תוצאת אימונובלוט בלתי מוגדרת (n=123) ב-"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1", 72 דגימות (58.5%) הראו תוצאה חיובית. מתוכם, 26 סרומים (21.1%) חיוביים רק ל-p24, 20 (16.3%) - רק לנוגדנים, 16 (13%) - ל-p24 עם נוגדנים לאחד מהחלבונים, 10 (8.1%) - ב-p24 עם נוגדנים לשניים או יותר מהחלבונים. לפיכך, בדיקת נוגדנים בלבד (ללא זיהוי של p24) תביא לכך ש-30 דגימות (24.4%) יהיו חיוביות. זיהוי האנטיגן p24 בבדיקה איפשר לקבוע כחיובי 42 דגימות נוספות (34.1%).

כדי להעריך את הספציפיות של מערכת הבדיקה, נעשה שימוש בפאנל סטנדרטי של סרה שלא מכיל נוגדנים ל-HIV 1,2 (n=20); דגימות סרום דם מתורמים בריאים (n=610), דגימות סרום דם מחולים עם מחלות זיהומיות שונות (n=224) שאינן קשורות ל-HIV; דגימות סרום דם של חולים עם מחלות שונות שאינן מדבקות - פציעות, מחלות של מערכת הלב וכלי הדם, אונקולוגיה (n=35); דגימות סרום דם של נשים בהריון (n=40). בסך הכל נבדקו 929 דגימות. דגימה אחת מסרת הדם של תורמים בריאים הראתה תוצאה חיובית שגויה - זוהו נוגדנים ל-gp41 ו-p24. 7 דגימות של סרחי דם מתורמים בריאים ו-2 דגימות של סרחי דם מחולים עם מחלות זיהומיות שאינן קשורות ל-HIV הראו תוצאה חיובית כוזבת עבור p24.

כדי להעריך את הספציפיות של מערכת הבדיקה, נעשה שימוש בפאנל סטנדרטי של דגימות שליליות (OSO 42-28-214-94-02p, p. 009). הספציפיות הייתה 100%.

לפיכך, המחקרים שנערכו הראו כי הספציפיות של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" היא 99% ​​במחקר של דגימות סרום דם של תורמים נורמליים וחולים עם זיהומים שונים. ומחלות סומטיות.

הנתונים שהתקבלו מראים את יעילות האבחון הגבוהה של מערכת הבדיקות שפותחה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1". מערכת הבדיקה יכולה לשמש לאיתור נוגדנים לחלבונים בודדים מסוג HIV מסוג 1 ו-2 והאנטיגן HIV1 p24 על מנת לאשר תוצאת בדיקה חיובית עם מערכות בדיקה המאתרות נוגדנים, או מערכות בדיקה שמגלות בו זמנית נוגדנים ואנטיגן HIV1 p24. מערכת הבדיקה יכולה לשמש כבדיקת אימונובלוט אלטרנטיבית כדי לאשר תוצאות חיוביות, כמו גם לחקור את הדינמיקה של נוגדנים ל-HIV ולאנטיגן p24 בשלבים שונים של זיהום.

יתרונות הבדיקה

1. פורמט לוחית בדיקת אנזים אימונומאשמת

2. בדיקה מאששת המשלבת ספקטרום נוגדנים HIV 1, 2 ואנטיגן HIV 1 p24

3. איתור נוגדנים מכל מחלקות ה-Ig

4. הרגישות לזיהוי של p24 היא לא פחות מ-5 pg/ml

5. מפחית תוצאות בלתי מוגדרות בהשוואה לאימונובלוט

6. זמן ניתוח - שעה 25 דקות (אימונובלוט - מ-3 עד 20 שעות)

7. הערכה ויזואלית של הכנסת כל הרכיבים והדגימות.

1. מערכת בדיקת ELISA לזיהוי ספקטרום הנוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מהסוג הראשון והשני, הסוג הראשון של קבוצת O וגילוי האנטיגן p24 לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג הראשון p24, מאופיין בכך שהוא כולל חומר חיסוני המבוסס על אנטיגנים של וירוס כשל חיסוני gp41 (env HIV-1 ו-HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), נוגדנים לאנטיגן HIV 1 p24, ואיתור ריאגנטים, בעוד שאנטיגנים של HIV ונוגדני HIV הנ"ל נספגים בבארות שונות של צלחות לצורך בדיקת אנזים חיסונית.

2. מערכת בדיקת ELISA לפי תביעה 1, המאופיינת בכך שצלחות פוליסטירן מתקפלות או בלתי מתקפלות לביצוע בדיקת אנזים חיסונית משמשות לספיחה.

הנפוצה ביותר בעולם כיום היא איידס - וירוס מתת-משפחת הרטרו-וירוסים, הם נקראים גם lentiviruses, או "איטיים". ואכן, בגוף האדם הם מתחילים להראות פעילות לאחר זמן רב יחסית, כ-10 שנים מאוחר יותר.

קיים כשל חיסוני מהסוג הראשון והשני. אבל אנחנו יכולים לדבר בבטחה על התרחבות הסוג הראשון של הנגיף. ברגע שהוא נכנס לזרם הדם ומצטרף לתא שאחראי על חסינות, הנגיף מתחיל להתרבות במהירות. בעוד שמולקולת CD4 האחראית לזיהויה מזהה את האויב הערמומי, היא מצליחה להדביק את הגוף כולו. לכן, ככל שהוא מאובחן מוקדם יותר, כך גדל הסיכוי שהמטופל יקבל טיפול בזמן ויחיה יותר.

אם לאדם יש סיבה לבדוק את עצמו לאיידס, יש לעשות זאת מיד. לרוב, הבסיס לאבחנה כזו הוא קביעת נוגדנים למחסור חיסוני בדם - חלבונים המתעוררים כתגובה לנוכחות נגיף, והם מתחילים להיווצר בתקופה שבין 1.5 ל-6 חודשים מרגע המחלה. זיהום אפשרי. בהתאם, כדאי יותר לעבור אבחון לאחר תקופה זו.

כמות הנוגדנים נקבעת באמצעות בדיקה הנקראת אנזים immunoassay (ELISA). שיטה זו מהימנה, היא מדויקת יחסית ורגישה מאוד, הנתונים הללו הם מעל 99.5%. שוק התרופות מציע מספר ערכות בדיקות אבחון עבור ELISA: Combibest HIV, Anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV, CombiBest anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. מערכות בדיקה אלו שייכות למערכת השלישית. דוֹר. החיסרון של ריאגנטים אלה הוא שהם לא תמיד מזהים את המחלה ב דייטים מוקדמים. אדם הוא כבר נשא וירוס, הוא עלול להיות מסוכן עבור בני זוג, אך עדיין אין נוגדנים בדם.

הערכות מצוידות בעיקר במספר בדיקות לבדיקות 12*8 או 192 בדיקות נגד HIV. לא מומלץ להשתמש בהם לבד. בתיאור התרופות נכתב כי מטרתן העיקרית היא לאתר את כמות הנוגדנים לשני סוגי האיידס. וגם כדי לקבוע את הנוגדנים של כל המעמדות לאיידס. אם אין נוגדנים, אז המחלה לא מאובחנת.

הדור הרביעי של הבדיקות "רואה", בנוסף לנוגדנים, ואנטיגנים לאיידס, הם מסוגלים לזהות זיהום מוקדם מהאמצעים של הדור השלישי. לשם השוואה: אנטיגן HIV נמצא בדם, החל מהיום החמישי, והנוגדנים הראשונים מופיעים לא לפני חודש לאחר מכן. CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (סט 1) ו-CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (סט 2) שייכים לבדיקות הדור הרביעי. באמצעות קבוצה של ריאגנטים אלה, נוגדנים לאנטיגן מסוג 1, 2 ו-p24 מזוהים על ידי בדיקת סרום אנושי או פלזמה. מדינות רבות משתמשות בבדיקת ELISA של 4 דורות בדיוק, הנקראת גם Antigen / Antibody, בקיצור AGAT.

הבדיקה נעשית בעילום שם.


הדבקה ב-HIV מסווגת כמחלה בלתי מבוקרת בשל היעדר שיטות למניעה ספציפית שלה ויעילות לא מספקת של הטיפול. לכן, כדי לשלוט במצב האפידמיולוגי של הידבקות ב-HIV, משתמשים כיום בעיקר בשיטות סקר. בדיקות אבחון. המקום המוביל בין השיטות לאבחון זיהום ב-HIV תופס על ידי בדיקת אנזימים מקושרים אימונוסורבנטיים (ELISA), המאפשר לזהות סמנים סרולוגיים של הגורם הגורם למחלה זו באנשים שנבדקו.

דוח זה מציג את התוצאות של קביעת נוגדנים ל-HIV בנסיוב הדם של 40,823 אנשים, כולל חולים מרפאות לפני לידה, מרפאות, בתי חולים בעיר, וכן מרכזים רפואייםמתמחה בבדיקה וטיפול בחולים בסיכון (מכורים לסמים, חולים בצהבת נגיפית B, C ומחלות מין). המחקרים בוצעו בשנת 2005 במעבדה לאימונולוגיה של מכון המחקר למיילדות וגינקולוגיה ע"ש. לפני. אוט מהאקדמיה הרוסית למדעי הרפואה, בעל יותר מ-15 שנות ניסיון בשימוש בשיטות ELISA לאבחון של מחלות מדבקות.

לבדיקה ראשונית של דגימות סרום דם, נעשה שימוש במערכת הבדיקה CombiBest anti-HIV-1 + 2 (ZAO Vector-Best, נובוסיבירסק), המזהה את סך כל הנוגדנים הספציפיים ל-HIV-1 ול-HIV-1 בדגימות הנבדקות של בני אדם. סרום או פלזמה בדם.2 (אימונוגלובולינים מדרגות A, G ו-M). בערכת אבחון זו, משתמשים בחלבוני HIV רקומביננטיים הן לצורך אימוביליזציה בבארות הטבליות והן כצימוד עם פרוקסידאז חזרת. תוצאות ניתוח הסרה הוערכו בהתאם להוראות מערכת הבדיקה: שליליות (לא מכילות נוגדנים ל-HIV-1 ו-HIV-2) נחשבו לדגימות בדיקה, שהצפיפות האופטית (OD) שלהן ב-ELISA לא עלתה על ערך ODcrit.

כאשר נבדקו במעבדה, 40,222 (98.5%) מתוך 40,823 דגימות סרום נמצאו שליליות ל-ELISA, ו-601 (1.5%) מהדגימות שנבדקו נחשבו חיוביות תחילה. כתוצאה מניתוח מחדש למחרת של כל אחד מ-601 הסרה בכפולות (שתי בארות של הטבליה), 440 (73.2%) דגימות זוהו כחיוביות ו-161 (26.8%) כשליליות. בהתאם להמלצות משרד הבריאות והפיתוח החברתי, הוקפאו 440 סרמים חיוביים להקרנה והועברו למחקרי אישור נוספים לחדר הייעוץ והאבחון של מעבדת הייחוס של בית החולים מס'. S.P. בוטקינה. מחקרים אלו בוצעו באמצעות מערכות בדיקת ELISA "ECOlab-Vironostics HIV 1.2 Ag/Ab" ("ECOlab", Elektrogorsk), "Genscreen Plus HIV Ag-Ab" (BioRad, ארה"ב), כמו גם ערכות אימונובלוט. תוצאות הניתוח של 440 סרה בבדיקות אישור הובילו למסקנה ש-323 (73.4%) דגימות חיוביות, ו-102 (23.2%) שליליות. עבור 15 דגימות שנבדקו (3.4%), התקבלה תוצאה אנליטית בלתי מוגדרת.

יצוין כי ערכי ה-OD שהתקבלו במעבדה שלנו במהלך הבדיקה הראשונית שלהם באמצעות מערכת הבדיקה CombiBest anti-HIV-1+2 עבור 314 (97.2%) מתוך 323 הסמים החיוביים הללו נעו בין 0.900 ל-1.780, ועבור 9 (2.8%) דגימות - 0.500–0.900. ערכי OD שהתקבלו על ידי בדיקת 102 סמים שליליים עבור 52 דגימות (51%) נעו בין 0.195 ל-0.400; עבור 40 (39.2%) דגימות - 0.401–0.800; 10 (9.8%) דגימות - יותר מ-0.800.

כך, כתוצאה מהעבודה שבוצעה, הוכח כי הבדיקה הראשונית של סרום הדם לאיתור סמנים סרולוגיים לזיהום ב-HIV באמצעות מערכת הבדיקות CombiBest anti-HIV-1+2 יעילה ביותר. תוצאות סקר חיוביות אושרו על ידי מחקרים נוספים במעבדת הייחוס ב-73% מהמקרים, ותוצאות חיוביות כוזבות נרשמו רק עבור 0.25% מתוך 40,823 סמים שנותחו.


עוד על נושא המאמר: