ल्यूकेमिया के निदान के लिए इस्तेमाल की जाने वाली विधियाँ। तीव्र ल्यूकेमिया का निदान। ल्यूकेमिया। नैदानिक ​​और प्रयोगशाला निदान

ल्यूकेमिया का संदेह नैदानिक ​​लक्षणों और परिधीय रक्त में निम्नलिखित परिवर्तनों की उपस्थिति में होता है: नॉरमोक्रोमिक नॉरमोसाइटिक एनीमिया; ल्यूकोसाइट्स की संख्या भिन्न हो सकती है - कम (5 109 / एल से नीचे), सामान्य (5 109 / एल से 20 109 / एल तक), बढ़ी हुई (20 109 / एल से अधिक, कुछ मामलों में 200 109 / एल तक पहुंच); न्यूट्रोपेनिया (ल्यूकोसाइट्स की कुल संख्या पर निर्भर नहीं करता है); पूर्ण लिम्फोसाइटोसिस; थ्रोम्बोसाइटोपेनिया (लगभग हमेशा मौजूद); "ल्यूकेमिक विफलता" - विस्फोटों की उपस्थिति, मध्यवर्ती रूपों की अनुपस्थिति की पृष्ठभूमि के खिलाफ परिपक्व रूप; तीव्र मायलोब्लास्टिक ल्यूकेमिया में, एज़ूरोफिलिक ग्रैन्यूल और एयूआर छड़ का पता लगाया जा सकता है।

अस्थि मज्जा का पंचर

अस्थि मज्जा पंचर ल्यूकेमिया के लिए मुख्य शोध पद्धति है। इसका उपयोग निदान की पुष्टि करने और ल्यूकेमिया के प्रकार (रूपात्मक, इम्यूनोफेनोटाइपिक, साइटोजेनेटिक) की पहचान करने के लिए किया जाता है। अस्थि मज्जा की आकांक्षा इसकी कमी (हेमटोपोइजिस का दमन) और इसमें रेशेदार संरचनाओं की बढ़ी हुई सामग्री के कारण मुश्किल हो सकती है।

मायलोग्राम ( परिमाणअस्थि मज्जा के सभी सेलुलर रूप) तीव्र ल्यूकेमिया में: ब्लास्ट कोशिकाओं की सामग्री में 5% से अधिक और कुल ब्लास्टोसिस तक की वृद्धि; ल्यूकेमिया के प्रकार के आधार पर धमाकों की आकृति विज्ञान भिन्न होता है; मध्यवर्ती रूपों में वृद्धि; लिम्फोसाइटोसिस; हेमटोपोइजिस का लाल रोगाणु उदास है (तीव्र एरिथ्रोमाइलोसिस के अपवाद के साथ); मेगाकारियोसाइट्स अनुपस्थित हैं या उनकी संख्या नगण्य है (तीव्र मेगाकारियोब्लास्टिक ल्यूकेमिया के अपवाद के साथ)।

तीव्र ल्यूकेमिया के रूपों के निदान के लिए साइटोकेमिकल परीक्षा मुख्य विधि है। यह विभिन्न विस्फोटों के लिए विशिष्ट एंजाइमों की पहचान करने के लिए किया जाता है। तो, ओजेयूआई के साथ, ग्लाइकोजन के लिए एक सकारात्मक पीएएस प्रतिक्रिया, लिपिड, पेरोक्सीडेज और क्लोरोएसेटेट एस्टरेज़ के लिए एक नकारात्मक प्रतिक्रिया निर्धारित की जाती है। तीव्र माइलॉयड ल्यूकेमिया में - मायलोपरोक्सीडेज, लिपिड, क्लोरोएसेटेट एस्टरेज़ के लिए एक सकारात्मक प्रतिक्रिया। पीएएस-प्रतिक्रिया तीव्र मायलोइड ल्यूकेमिया के रूप पर निर्भर करती है।

धमाकों की इम्यूनोफेनोटाइपिंग एक फ्लो साइटोमीटर पर एक स्वचालित विधि द्वारा या प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके कांच पर एंजाइम इम्यूनोएसे द्वारा की जाती है। उत्तरार्द्ध का यह फायदा है कि इसे साइटोकेमिकल अध्ययन के समानांतर किया जा सकता है। इम्यूनोफेनोटाइपिंग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करके ब्लास्ट सेल भेदभाव (सीडी मार्कर) के समूहों की उपस्थिति या अनुपस्थिति को निर्धारित करना संभव बनाता है। इसका कार्यान्वयन मुख्य रूप से आवश्यक है सटीक निदानसभी, साथ ही मुश्किल मामले क्रमानुसार रोग का निदानतीव्र लिम्फोब्लास्टिक और माइलॉयड ल्यूकेमिया। यह एक मौलिक बिंदु है, क्योंकि इन रूपों का उपचार अलग है।

ल्यूकेमिया कोशिकाओं का साइटोजेनेटिक अध्ययन आपको गुणसूत्र संबंधी असामान्यताओं और आगे के पूर्वानुमान को निर्धारित करने की अनुमति देता है।

अन्य अनिवार्य प्राथमिक अनुसंधान विधियां

• शराब अनुसंधान। धमाकों के कारण बढ़ी हुई साइटोसिस न्यूरोल्यूकेमिया का संकेत देती है।
• अंगों की एक्स-रे परीक्षा छाती: इंट्राथोरेसिक में वृद्धि के कारण मीडियास्टिनम की छाया का विस्तार लसीकापर्व, फेफड़ों में ल्यूकेमिया।
• एक जैव रासायनिक रक्त परीक्षण, ईसीजी, इकोकार्डियोग्राफी, ईईजी महत्वपूर्ण अंगों के कार्यों के प्रारंभिक संकेतकों को निर्धारित करने के लिए आवश्यक हैं और कीमोथेरेपी से पहले और उसके दौरान किए जाते हैं, क्योंकि उपयोग किए गए साइटोस्टैटिक्स में कार्डियोटॉक्सिक, हेपेटोटॉक्सिक और नेफ्रोटॉक्सिक गुण होते हैं।
• अल्ट्रासाउंड: यकृत और प्लीहा का इज़ाफ़ा, पैरेन्काइमल अंगों में ल्यूकेमॉइड घुसपैठ का केंद्र।

दक्षताओं: OK-1, OK-8, PC-3, PC-5, PC-15, PC-17, PC-27

विषय की प्रासंगिकता।हेमोब्लास्टोस को रोगों के एक व्यापक समूह द्वारा दर्शाया जाता है जो नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों के बहुरूपता में भिन्न होते हैं और सभी विशिष्टताओं के डॉक्टरों के अभ्यास में पाए जाते हैं।

लक्ष्य:तीव्र और जीर्ण ल्यूकेमिया की नैदानिक ​​और प्रयोगशाला विशेषताओं का अध्ययन करना।

कार्य:

1. हेमोब्लास्टोस के एटियलजि, रोगजनन को समझें।

2. तीव्र और जीर्ण ल्यूकेमिया के वर्गीकरण और नैदानिक ​​और प्रयोगशाला निदान को जानें।

3. Doइस प्रकार की विकृति वाले रोगियों का वस्तुनिष्ठ अध्ययन करने में सक्षम हो।

पिछले विभागों और पाठ्यक्रमों में अध्ययन किए गए संबंधित विषयों पर नियंत्रण प्रश्न।

हेमटोपोइएटिक कौन से अंग हैं?

अस्थि मज्जा की कोशिकीय संरचना का नाम बताइए।

हेमटोपोइजिस सामान्य रूप से कैसे होता है?

एरिथ्रोसाइट्स की संरचना और कार्य की व्याख्या करें?

मानव लाल रक्त के सामान्य मूल्यों के नाम बताइए।

ल्यूकोसाइट्स के मुख्य कार्यों की सूची बनाएं।

परिधीय रक्त में ल्यूकोसाइट्स की सामान्य सामग्री क्या है?

ल्यूकोसाइट सूत्र का नाम बताइए।

ग्रैन्यूलोसाइट्स कौन सी रक्त कोशिकाएं हैं?

न्यूट्रोफिल की रूपात्मक संरचना क्या है?

न्यूट्रोफिल की कार्यात्मक भूमिका क्या है?

बेसोफिल और मस्तूल कोशिकाओं की रूपात्मक संरचना और कार्यों का वर्णन करें।

ईोसिनोफिल्स के कार्यों और संरचना का वर्णन करें।

मोनोसाइट्स और मैक्रोफेज की कार्यात्मक भूमिका और संरचना क्या है?

लिम्फोसाइटों की संरचना, प्रकार और कार्यों का वर्णन करें।

लिम्फ नोड्स की रूपात्मक संरचना क्या है?

लिम्फ नोड्स के संरचनात्मक समूहों की सूची बनाएं।

तिल्ली की संरचना और कार्य के बारे में बताएं?

प्लेटलेट्स की रूपात्मक संरचना और कार्य क्या है?

अध्ययनाधीन विषय पर प्रश्नों को नियंत्रित करें।

कौन से एटियलॉजिकल कारक ल्यूकेमिया के विकास का कारण बन सकते हैं?

ल्यूकेमिया के रोगजनन की व्याख्या करें।

ल्यूकेमिया को कैसे वर्गीकृत किया जाता है?

मुख्य क्या हैं नैदानिक ​​सिंड्रोमतीव्र ल्यूकेमिया में मनाया गया?

तीव्र ल्यूकेमिया के निदान में कौन सा प्रयोगशाला सिंड्रोम निर्णायक है?

चरणों का नाम दें तीव्र ल्यूकेमिया

ल्यूकेमिक प्रोलिफरेशन सिंड्रोम चिकित्सकीय रूप से कैसे प्रकट होता है?

तीव्र ल्यूकेमिया में रक्तस्रावी सिंड्रोम के नैदानिक ​​और प्रयोगशाला अभिव्यक्तियों के नाम बताएं।

सबसे विशिष्ट क्या है नैदानिक ​​लक्षणक्रोनिक मिलॉइड ल्यूकेमिया?

क्रोनिक माइलॉयड ल्यूकेमिया की विशेषता प्रयोगशाला संकेतों का नाम दें।

क्रोनिक लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया के लिए कौन सा नैदानिक ​​लक्षण सबसे विशिष्ट है?

क्रोनिक लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया में कौन सा रक्त चित्र देखा जाता है?

एरिथ्रेमिया में कौन से नैदानिक ​​​​सिंड्रोम देखे जाते हैं?

एरिथ्रेमिया का निदान किस प्रयोगशाला डेटा के आधार पर स्थापित किया जा सकता है?

मल्टीपल मायलोमा की विशेषता नैदानिक ​​​​सिंड्रोम का नाम दें।

कौन सा प्रयोगशाला डेटा मल्टीपल मायलोमा के निदान को स्थापित करने की अनुमति देता है?

मल्टीपल मायलोमा के निदान के लिए कौन सा नैदानिक ​​मानदंड निर्णायक है?

हेमोब्लास्टोसिस ट्यूमर का एक समूह है जो हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं से उत्पन्न होता है। वे ल्यूकेमिया और हेमटोसारकोमा में विभाजित हैं। ल्यूकेमिया अस्थि मज्जा में प्राथमिक स्थानीयकरण के साथ हेमटोपोइएटिक ऊतक के ट्यूमर हैं। हेमटोसारकोमा हेमटोपोइएटिक ऊतक से प्राथमिक एक्स्ट्रामेडुलरी स्थानीयकरण और स्पष्ट स्थानीय ट्यूमर वृद्धि के साथ ट्यूमर हैं।

सभी ल्यूकेमिया तीव्र और जीर्ण में विभाजित हैं। निर्धारण विशेषता प्रक्रिया की गति नहीं है, बल्कि ट्यूमर बनाने वाली कोशिकाओं की आकृति विज्ञान है। यदि अधिकांश कोशिकाओं को विस्फोटों द्वारा दर्शाया जाता है, तो हम तीव्र ल्यूकेमिया के बारे में बात कर रहे हैं। क्रोनिक ल्यूकेमिया में, अधिकांश ट्यूमर कोशिकाएं परिपक्व और परिपक्व तत्व होती हैं।

हेमोब्लास्टोस की एटियलजि।

आयनीकरण विकिरण

रासायनिक उत्परिवर्तजन: विषाक्त पदार्थ (बेंजीन), साइटोस्टैटिक्स।

वायरल कारक (एपस्टीन-बार वायरस)

आनुवंशिकता की भूमिका: हेमटोपोइएटिक रोगाणुओं में आनुवंशिक दोष, प्रतिरक्षा तंत्रगुणसूत्र संबंधी असामान्यताएं।

रोगजनन।

सभी हेमोब्लास्टोस की नियोप्लास्टिक वृद्धि क्लोनलिटी पर आधारित होती है: प्रत्येक ल्यूकेमिया अपनी कोशिकाओं के पूरे द्रव्यमान को उनके मूल एकल कोशिका में उत्परिवर्तन के कारण देता है। हेमोब्लास्टोस की रोगजनक विशेषता ट्यूमर प्रक्रिया की क्रमिक दुर्दमता है, जिसे शब्द - ट्यूमर प्रगति द्वारा दर्शाया गया है। ट्यूमर की प्रगति के पैटर्न को कई नियमों द्वारा दर्शाया गया है:

1. हेमोब्लास्टोस दो चरणों से गुजरते हैं: मोनोक्लोनल (सौम्य) और पॉलीक्लोनल (घातक)।

2. सामान्य हेमटोपोइएटिक स्प्राउट्स का निषेध और, सबसे पहले, उस स्प्राउट का जिससे हेमोब्लास्टोसिस विकसित हुआ।

3. पुरानी ल्यूकेमिया, ब्लास्ट (विस्फोट संकट की शुरुआत) में ट्यूमर बनाने वाली विभेदित कोशिकाओं का परिवर्तन।

4. ट्यूमर कोशिकाओं द्वारा एंजाइमी विशिष्टता का नुकसान: रूपात्मक रूप से, कोशिकाएं अविभाजित हो जाती हैं।

5. हेमटोपोइजिस के एक्स्ट्रामेडुलरी फॉसी की उपस्थिति।

6. साइटोस्टैटिक थेरेपी से ट्यूमर की ऐंठन या क्रमिक वापसी।

ल्यूकेमिया क्रमिक रूप से प्रगति के विभिन्न चरणों से गुजर सकता है, लेकिन कभी-कभी रोग अंतिम चरण के लक्षणों के साथ शुरू होता है।

तीव्र ल्यूकेमिया।

तीव्र ल्यूकेमिया रक्त प्रणाली के ट्यूमर रोगों का एक समूह है - हेमोब्लास्टोस। तीव्र ल्यूकेमिया को रूपात्मक रूप से अपरिपक्व - विस्फोट - हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं और परिधीय रक्त में उनकी उपस्थिति द्वारा अस्थि मज्जा को नुकसान की विशेषता है। भविष्य में या शुरुआत से ही, विभिन्न अंगों और ऊतकों की ब्लास्ट कोशिकाओं द्वारा घुसपैठ हो सकती है। सभी तीव्र ल्यूकेमिया क्लोनल होते हैं, अर्थात वे एकल उत्परिवर्तित कोशिका से उत्पन्न होते हैं। सभी प्रकार के तीव्र ल्यूकेमिया में ब्लास्ट कोशिकाओं को बड़े आकार, एक बड़े नाभिक की विशेषता होती है, जो लगभग पूरी कोशिका पर कब्जा कर लेता है और बड़े एकल नाभिक के साथ क्रोमैटिन की एक नाजुक जाल संरचना द्वारा प्रतिष्ठित होता है। एकल छोटे दानों के साथ एक संकीर्ण नीले या ग्रे-नीले रिम के रूप में कोशिकाओं का साइटोप्लाज्म।

वर्गीकरण के बारे मेंब्लास्ट कोशिकाओं के रूपात्मक, मुख्य रूप से साइटोकेमिकल, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल गुणों के आधार पर। तीव्र ल्यूकेमिया का नाम संबंधित हेमटोपोइएटिक स्प्राउट्स के सामान्य विस्फोटों के नाम पर रखा गया है। हेमटोपोइजिस की एक या दूसरी पंक्ति में ब्लास्ट कोशिकाओं से संबंधित, कुछ हद तक उनके भेदभाव की डिग्री तीव्र ल्यूकेमिया के नैदानिक ​​​​पाठ्यक्रम, चिकित्सा कार्यक्रम और रोग के पूर्वानुमान को निर्धारित करती है। तीव्र ल्यूकेमिया (घरेलू वर्गीकरण) के निम्नलिखित मुख्य रूप हैं:

तीव्र माइलॉयड ल्यूकेमिया:

सूक्ष्म अधिश्वेत रक्तता

तीव्र प्रोमायलोसाइटिक ल्यूकेमिया

तीव्र मायलोमोनोब्लास्टिक ल्यूकेमिया

तीव्र मोनोब्लास्टिक ल्यूकेमिया

तीव्र एरिथ्रोमाइलोसिस

अत्यधिक लिम्फोब्लासटिक ल्यूकेमिया

तीव्र अविभाजित ल्यूकेमिया

तीव्र बाइफेनोटाइपिक ल्यूकेमिया।

सेल भेदभाव (इम्यूनोफेनोटाइपिंग) के समूहों पर कुछ स्पष्टीकरण के साथ मौलिक अंतर के बिना अंतर्राष्ट्रीय फ्रेंको-अमेरिकन-ब्रिटिश (एफएबी) वर्गीकरण।

नैदानिक ​​तस्वीर।

विशिष्ट शुरुआत, तीव्र ल्यूकेमिया की विशेषता वाले विशिष्ट बाहरी लक्षण, नहीं मिल सकते हैं। तीव्र ल्यूकेमिया का निदान केवल रूपात्मक रूप से स्थापित किया जा सकता है - रक्त या अस्थि मज्जा में ब्लास्ट कोशिकाओं का पता लगाकर।

निम्नलिखित नैदानिक ​​​​सिंड्रोम प्रतिष्ठित हैं:

1. एनीमिक सिंड्रोम: कमजोरी, चक्कर आना, सांस की तकलीफ, क्षिप्रहृदयता, सिरदर्द, त्वचा का पीलापन, सभी बिंदुओं पर सिस्टोलिक बड़बड़ाहट, रक्तचाप में कमी, हीमोग्लोबिन, लाल रक्त कोशिकाएं।

2. रक्तस्रावी सिंड्रोम: त्वचा से रक्तस्राव, मसूड़ों से रक्तस्राव, नाक और गर्भाशय से रक्तस्राव, घर्षण से रक्तस्राव, छोटे कट आदि, जो मुख्य रूप से थ्रोम्बोसाइटोपेनिया के कारण होते हैं।

बैक्टीरियल और वायरल जटिलताओं का सिंड्रोम: बुखार, कमजोरी, पसीना, वजन घटना, नशा की अभिव्यक्तियाँ, विभिन्न संक्रामक रोग(कतर ऊपरी श्वसन तंत्र, तोंसिल्लितिस, निमोनिया, दिमागी बुखार, पूति, आदि)

ल्यूकेमिक प्रसार का सिंड्रोम: बढ़े हुए लिम्फ नोड्स, प्लीहा, यकृत, मसूड़े की हाइपरप्लासिया, त्वचा के ल्यूकेमिया, न्यूरोल्यूकेमिया (मेनिन्ज की ल्यूकेमिक घुसपैठ)।

तीव्र ल्यूकेमिया के दौरान, निम्नलिखित चरणों को प्रतिष्ठित किया जाता है:

1. प्रारंभिक - प्रील्यूकेमिया। केवल पूर्वव्यापी रूप से मूल्यांकन किया जा सकता है।

2. रोग की उन्नत अवस्था। यह सामान्य हेमटोपोइजिस के गंभीर निषेध, अस्थि मज्जा के महत्वपूर्ण ब्लास्टोसिस, परिधीय रक्त की विशेषता है।

3. पूर्ण (नैदानिक ​​​​और हेमटोलॉजिकल) छूट: अस्थि मज्जा में 5% से अधिक ब्लास्ट कोशिकाएं नहीं होती हैं।

4. रिकवरी: 5 साल के लिए पूरी छूट।

5. अधूरा छूट।

6. विश्राम।

7. टर्मिनल चरण: साइटोस्टैटिक थेरेपी का कोई प्रभाव नहीं।

परिधीय रक्त के अध्ययन के परिणामों के अनुसार रोग के रूप: 1) अल्यूकेमिक - रक्त में ब्लास्ट कोशिकाओं की रिहाई के बिना; 2) ल्यूकेमिक - परिधीय रक्त में ब्लास्ट कोशिकाओं की रिहाई के साथ।

प्रयोगशाला निदान।

परिधीय रक्त परीक्षण:

1. थ्रोम्बोसाइटोपेनिया

   ल्यूकोसाइट्स की संख्या भिन्न हो सकती है। ल्यूकेमिक रूप को प्रतिष्ठित किया जाता है - ल्यूकोसाइट्स की संख्या में उल्लेखनीय वृद्धि, सबल्यूकेमिक - ल्यूकोसाइट्स की संख्या में मामूली वृद्धि, नॉर्मो- या ल्यूकोपेनिक - ल्यूकोसाइट्स की एक सामान्य या कम संख्या।

   विस्फोट कोशिकाओं की उपस्थिति। सूत्र में, ल्यूकेमिक विफलता की एक तस्वीर है: युवा - ब्लास्ट कोशिकाएं और परिपक्व ग्रैन्यूलोसाइट्स, मोनोसाइट्स, लिम्फोसाइट्स हैं, कोई संक्रमणकालीन रूप नहीं हैं (प्रोमाइलोसाइट्स, मायलोसाइट्स, मेटामाइलोसाइट्स।

स्टर्नल पंचर का अध्ययन: ब्लास्ट कोशिकाओं का पता लगाना और साइटोकेमिकल विश्लेषण, अस्थि मज्जा कोशिकाओं का इम्यूनोफेनोटाइपिंग।

चिकित्सा के सिद्धांत।

प्रेरण (प्राप्त करना) छूट - चुने हुए कार्यक्रम के अनुसार विभिन्न साइटोस्टैटिक दवाओं का एक संयोजन।

छूट का समेकन (छूट का समेकन)।

एंटी-रिलैप्स थेरेपी।

रोगसूचक चिकित्सा: जटिलताओं का उपचार।

बोन मैरो प्रत्यारोपण।

भविष्यवाणी।

ल्यूकेमिया के प्रकार के आधार पर, 60-70% रोगियों में छूट प्राप्त की जाती है, उपचारित रोगियों में से 80% को एक विश्राम का अनुभव होता है, और 10-15% में पूर्ण इलाज होता है।

गोस्ट 25382-82
(एसटी एसईवी 2702-80,
एसटी एसईवी 6284-88)*
______________________
* मानक पदनाम।
संशोधित संस्करण, रेव. एन 1।

ग्रुप सी79

SSR . के संघ का राज्य मानक

पशु

ल्यूकेमिया के प्रयोगशाला निदान के तरीके

घरेलु पशु। ल्यूकोसस के प्रयोगशाला निदान के तरीके

परिचय दिनांक 1983-01-01

11 जनवरी, 1982 एन 3153 दिनांकित यूएसएसआर स्टेट कमेटी फॉर स्टैंडर्ड्स का फरमान, वैधता अवधि 01/01/83 से 01/01/88 * निर्धारित की गई है।
________________
* मानकीकरण, मेट्रोलॉजी और प्रमाणन के लिए अंतरराज्यीय परिषद के प्रोटोकॉल के अनुसार वैधता अवधि हटा दी गई थी (आईयूएस एन 2, 1993)

मंत्रालय द्वारा विकसित कृषिसोवियत संघ

कलाकारों

एलजी बरबा; ए.एफ. वलिखोव; ईए डन; एलए जिनेविच; एम.पी. कुद्रियात्सेवा; वी.एम.नखमन्स; जी.ए.सिमोनियन

यूएसएसआर के कृषि मंत्रालय द्वारा पेश किया गया

11 अगस्त, 1982 एन 3153 के मानकों के लिए यूएसएसआर स्टेट कमेटी के डिक्री द्वारा स्वीकृत और पेश किया गया

पेश किया गया संशोधन एन 1, 06.23.89 एन 1957 के यूएसएसआर के राज्य मानक के डिक्री द्वारा 01.01.90 को स्वीकृत और लागू किया गया

IUS N 10, 1989 . के पाठ के अनुसार डेटाबेस निर्माता द्वारा परिवर्तन N 1 को बनाया गया था


यह मानक मवेशियों पर लागू होता है और ल्यूकेमिया के प्रयोगशाला निदान के लिए तरीके स्थापित करता है।

मानक अनुसंधान संस्थानों के लिए अभिप्रेत है।

मानक पूरी तरह से एसटी एसईवी 2702-80 का अनुपालन करता है।

1. नमूनाकरण के तरीके

1. नमूनाकरण के तरीके

1.1. हेमटोलॉजिकल परीक्षा के लिए, एक थक्कारोधी के साथ टेस्ट ट्यूब में सड़न रोकनेवाला के नियमों के अनुपालन में जानवर की नस से रक्त के नमूने लिए जाते हैं - एथिलीनडायमिनेटेट्राएसेटिक एसिड (EDTA) के डिसोडियम नमक का 10% घोल - 0.02 सेमी 3 प्रति 1 की दर से। रक्त का सेमी2। 25 डिग्री सेल्सियस तक गर्म किए गए वसा रहित कांच की स्लाइड पर ताजा या स्थिर रक्त से पतले रक्त स्मीयर तैयार किए जाते हैं।

अनुसंधान के लिए स्थिर रक्त के नमूने प्रयोगशाला में भेजे जाते हैं और लेने के 36 घंटे बाद में जांच नहीं की जाती है। अनुसंधान के लिए नमूने जानवरों को टीके और एलर्जी की शुरूआत के 15 दिन पहले, ब्याने से 15 दिन पहले और ब्याने के 15 दिन बाद नहीं लिए जाते हैं।

1.2. सीरोलॉजिकल परीक्षण के लिए, रक्त के नमूने एक नस से बाँझ टेस्ट ट्यूब में लिए जाते हैं। नमूनों के लंबे समय तक भंडारण के साथ, रक्त सीरम को थक्के से अलग किया जाता है। सीरम को शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस और नीचे के तापमान पर संग्रहित किया जाता है। फैलाना वर्षा प्रतिक्रिया (आरआईडी) में गोजातीय ओंकोर्नवायरस एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी की उपस्थिति के लिए परीक्षण करते समय, क्लॉज 1.1 के अनुसार लिए गए स्थिर रक्त प्लाज्मा का उपयोग किया जाता है।

1.3. हेमटोलॉजिकल और सीरोलॉजिकल रक्त परीक्षण के लिए लिए गए नमूनों को लेबल किया जाता है और प्रयोगशाला में भेजा जाता है, जिसमें फार्म का नाम (विभाग, फार्म), संख्या या उपनाम, लिंग और जानवर की उम्र का संकेत होता है।

1.4. हिस्टोलॉजिकल और साइटोलॉजिकल अध्ययनों के लिए, पशु की मृत्यु या वध के बाद 8 घंटे के बाद लाशों से रोग संबंधी सामग्री ली जाती है। नमूने 1:30 के अनुपात में फिक्सिंग समाधान में रखे जाते हैं।

हिस्टोलॉजिकल जांच के लिए, अंगों और ऊतकों के टुकड़े काट दिए जाते हैं (लिम्फ नोड्स, प्लीहा, यकृत, गुर्दे, हृदय, मांसपेशियां, स्तन की हड्डी, पाचन अंगों की दीवार और अन्य ऊतक) आकार में 2x2x1 सेमी। टुकड़ों को काट दिया जाता है ताकि अगले सामान्य ऊतक में परिवर्तित और आसन्न कपड़ों के क्षेत्र होते हैं। शोध के लिए सामग्री को फार्मलाडेहाइड के 8-10% जलीय घोल के साथ भली भांति बंद करके सील किए गए बर्तन में रखा जाता है। पोत को लेबल किया जाता है और एक संलग्न दस्तावेज के साथ प्रयोगशाला में भेजा जाता है।

1.5. के लिये साइटोलॉजिकल परीक्षाताजा रक्त से स्मीयर तैयार करें और पशु की बायोप्सी या वध द्वारा प्राप्त हेमटोपोइएटिक और अन्य अंगों से तैयारियां प्रिंट करें। ऐसा करने के लिए, पंचर सुई का उपयोग करके, सड़न रोकनेवाला और एंटीसेप्सिस के नियमों का पालन करते हुए, वे जानवरों से अस्थि मज्जा (स्तन की हड्डी) और लिम्फ नोड्स से पंचर लेते हैं और कांच की स्लाइड पर स्मीयर तैयार करते हैं। अंग के एक टुकड़े की कटी हुई सतह को कांच की स्लाइड से छूकर छाप की तैयारी की जाती है।

1.6. के लिये एंजाइम इम्युनोसेताजा रक्त के नमूने का उपयोग करें, लेकिन लेने के एक दिन से पहले नहीं। अपर्याप्त रूप से स्पष्ट किया गया रक्त सीरा अपकेंद्रित्र होता है। नमूनों के लंबे समय तक भंडारण के दौरान, रक्त सीरम को रक्त के थक्के से अलग किया जाता है। प्लस 4 डिग्री सेल्सियस पर नमूने संग्रहीत करते समय, सीरा 10 दिनों के भीतर शोध के लिए उपयुक्त होते हैं। सीरम को माइनस 20 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहीत करते समय, शोध के लिए सीरम का शेल्फ जीवन 1 वर्ष होता है। विघटित और अत्यधिक हेमोलाइज्ड सीरा अनुसंधान के लिए उपयुक्त नहीं हैं।

(अतिरिक्त रूप से प्रस्तुत, रेव। एन 1)।

2. अनुसंधान के तरीके

2.1. हेमटोलॉजिकल विधि

विधि का सार परिधीय रक्त में ल्यूकोसाइट्स की बढ़ी हुई संख्या, मुख्य रूप से लिम्फोइड श्रृंखला, और खराब विभेदित कोशिकाओं (पैतृक, प्रोलिम्फोसाइट्स, लिम्फोब्लास्ट्स), साथ ही साथ हेमटोपोइएटिक अंगों की पॉलीमॉर्फिक, एटिपिकल कोशिकाओं का पता लगाने में निहित है।

2.1.1. उपकरण, सामग्री और अभिकर्मक

2.1.1.1. अनुसंधान उपयोग के लिए:

इलेक्ट्रॉनिक कण काउंटर;

स्वचालित पतला;

गिनती के लिए काउंटर ल्यूकोसाइट सूत्र;

GOST 23932-79 * के अनुसार माइक्रोप्रोसेसर ग्लास फ़िल्टर;
________________
गोस्ट 23932-90। - डेटाबेस निर्माता का नोट।

GOST 8284-78 के अनुसार MBI या MRB ब्रांड के जैविक सूक्ष्मदर्शी;

GOST 20292-74 * के अनुसार 1, 2, 5, 10 सेमी की क्षमता वाले पिपेट;
________________
* . के क्षेत्र में रूसी संघगोस्ट 29169-91, गोस्ट 29227-91 - गोस्ट 29229-91, गोस्ट 29251-91 - गोस्ट 29253-91 मान्य हैं, इसके बाद पाठ में। - डेटाबेस निर्माता का नोट।

0.02 की क्षमता वाले माइक्रोपिपेट; 0.03; 0.05; 0.1; GOST 20292-74 के अनुसार 0.2 सेमी;

GOST 20292-74 के अनुसार 50, 100, 500, 1000 सेमी3 की क्षमता वाले सिलेंडरों को मापना;

प्रयोगशाला तराजू;

GOST 9284-75 के अनुसार ग्लास स्लाइड;

रक्त कोशिकाओं की गिनती के लिए एक कक्ष (गोरीव, बर्कर या अन्य ब्रांडों का एक कक्ष);

कांच की स्लाइडों पर स्मीयरों को ठीक करने और रंगने के लिए उपकरण;

GOST 13739-78 के अनुसार विसर्जन तेल;

गिमेसा डाई समाधान;

मुख्य-ग्रुनवल्ड रंगाई समाधान;

तुर्क का समाधान;

GOST 6995-77 के अनुसार मिथाइल अल्कोहल;

GOST 9949-76 के अनुसार xylene;

GOST 4233-77 के अनुसार सोडियम क्लोराइड;

GOST 1625-75 * के अनुसार तकनीकी फॉर्मेलिन (फॉर्मेल्डिहाइड);
________________
* रूसी संघ के क्षेत्र में, GOST 1625-89 लागू होता है। - डेटाबेस निर्माता का नोट।

आइसोटोनिक इलेक्ट्रोलाइट समाधान; रसोइया इस अनुसार: सोडियम क्लोराइड का 0.9% घोल लें, इसे माइक्रोपोरस फिल्टर (फिल्टर जी -4) से छान लें, इंडिकेटर पेपर से पीएच को नियंत्रित करें। ट्रिस बफर जोड़ते समय, पीएच को 6-7.2 पर समायोजित किया जाता है। 2 घंटे से अधिक समय तक घोल का उपयोग करते समय, प्रति 1000 मिलीलीटर इलेक्ट्रोलाइट में 35% फॉर्मलाडेहाइड घोल का 5 मिलीलीटर मिलाएं।

एरिथ्रोसाइटोलिसिस के लिए, सैपोनिन के 1% जलीय घोल का उपयोग किया जाता है, इसे 35% फॉर्मलाडेहाइड घोल के साथ 1000:5 के अनुपात में मिलाते हैं। फोम मुक्त समाधान तैयारी के तुरंत बाद फ़िल्टर किया जाता है;

स्थिर समाधान; इस प्रकार तैयार किया गया: एथिलीनडायमिनेटेट्राएसेटिक एसिड का 50 ग्राम डिसोडियम नमक, 35% फॉर्मलाडेहाइड घोल का 50 सेमी 3, 1% मेथिलीन ब्लू घोल का 2 सेमी 3 और आसुत जल का 50 सेमी 3 लें। घोल को पूरी तरह से घुलने तक गर्म किया जाता है और एक माइक्रोप्रोसेसर ग्लास फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है।

2.1.2. अनुसंधान का संचालन

अध्ययन द्वारा किया जाता है:

इलेक्ट्रॉनिक कण काउंटर का उपयोग करके ल्यूकोसाइट्स की संख्या की गणना करना;

मतगणना कक्ष में ल्यूकोसाइट्स की संख्या गिनना;

विभेदित ल्यूकोसाइट गिनती।

2.1.2.1. इलेक्ट्रॉनिक कण काउंटर का उपयोग करके ल्यूकोसाइट्स की संख्या की गणना प्रत्येक उपकरण से जुड़े नियमों के अनुसार की जाती है।

2.1.2.2. मतगणना कक्ष में ल्यूकोसाइट्स की संख्या की गणना इसके तकनीकी मापदंडों के अनुसार की जाती है।

2.1.2.3. ल्यूकोसाइट्स की एक विभेदित गणना (ल्यूकोसाइट सूत्र का निर्धारण) एक माइक्रोस्कोप के तहत एक दाग धब्बा में 90 के आवर्धन के साथ एक विसर्जन लेंस के साथ किया जाता है। एक ही समय में, कम से कम 100 कोशिकाओं की गणना की जाती है, समान रूप से सभी भागों को देखते हुए धब्बा। ल्यूकोसाइट्स की एक विभेदक गणना की जाती है यदि 1 सेमी रक्त में ल्यूकोसाइट्स की स्थापित संख्या "ल्यूकेमिया कुंजी" के अनुसार उनकी उम्र को ध्यान में रखते हुए, स्वस्थ जानवरों के लिए संकेतित संकेतकों से अधिक है।

अध्ययन के परिणामों का मूल्यांकन तालिका में इंगित आवश्यकताओं के अनुसार "ल्यूकेमिया कुंजी" के अनुसार किया जाता है।

जानवरों की उम्र, साल	हेमटोलॉजिकल रूप से संदिग्ध जानवर		ल्यूकेमिया के लिए हेमेटोलॉजिकल रूप से संदिग्ध जानवर		पशु जो ल्यूकेमिया के लिए हेमेटोलॉजिकल रूप से सकारात्मक हैं
	1 सेमी रक्त में ल्यूकोसाइट्स की संख्या				1 सेमी रक्त में लिम्फोसाइटों की पूर्ण संख्या
सेंट 1 से 2			9000 से 11000 . तक
				" 8000 " 10000
				" 6500 " 9000
				" 5500 " 8000

2.1.3. परिणाम प्रसंस्करण

यदि पशु में ल्यूकोसाइट्स की संख्या तालिका में इंगित संख्या से कम है, तो ल्यूकेमिया के अध्ययन के परिणाम को नकारात्मक (-) माना जाता है।

यदि लिम्फोसाइटों की संख्या तालिका में इंगित सीमा के भीतर है, तो परिणाम को संदिग्ध (+) के रूप में मूल्यांकन किया जाता है, यदि यह तालिका में निम्नतम संकेतक से कम है, तो परिणाम का मूल्यांकन नकारात्मक (-) के रूप में किया जाता है। यदि 1 सेमी रक्त में लिम्फोसाइटों की संख्या तालिका में संकेतित से अधिक है, तो परिणाम का मूल्यांकन सकारात्मक (+) के रूप में किया जाता है।

ल्यूकेमिया होने के संदेह वाले जानवरों को उनके बीच 30 दिनों के अंतराल के साथ दो या तीन परीक्षाओं के अधीन किया जाता है। यदि दूसरे और तीसरे अतिरिक्त अध्ययनों के दौरान नकारात्मक परिणाम प्राप्त होते हैं, तो ऐसे जानवरों को स्वस्थ के रूप में पहचाना जाता है, और जब रक्त में परिवर्तन स्थापित होते हैं जो रोगियों की विशेषता होती है या बीमारी होने का संदेह होता है, तो जानवरों को बीमार माना जाता है।

2.2. साइटोलॉजिकल विधि

विधि का सार रूपात्मक रूप से परिवर्तित, मुख्य रूप से अपरिपक्व (पैतृक, खराब विभेदित, लिम्फोब्लास्ट, प्रोलिम्फोसाइट्स, मायलोब्लास्ट, आदि) के संचय के परिधीय रक्त और हेमटोपोइएटिक अंगों (लाल अस्थि मज्जा, लिम्फ नोड्स, प्लीहा) में पता लगाने में निहित है। या पैथोलॉजिकल (ट्यूमर) कोशिकाएं।

2.2.1. उपकरण और अभिकर्मक

2.2.1.1. अनुसंधान के लिए, खंड 2.1.1 में निर्दिष्ट उपकरण और अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है, और इसके अतिरिक्त:

हेमटोपोइएटिक अंगों के पंचर के लिए सुई;

GOST 18137-77 के अनुसार 20 सेमी 3 की क्षमता वाला सिरिंज;

GOST 21240-77 * के अनुसार स्केलपेल;
________________
* रूसी संघ के क्षेत्र में, GOST 21240-89 लागू होता है। - डेटाबेस निर्माता का नोट।

कैंची;

GOST 22280-76 के अनुसार सोडियम साइट्रेट, 3.8% समाधान;

गोस्ट 5962-67 *।
________________
* रूसी संघ के क्षेत्र में, GOST R 51652-2000 लागू होता है, इसके बाद पाठ में। - डेटाबेस निर्माता का नोट।

2.2.2. अनुसंधान का संचालन

2.2.2.1. ताजा रक्त, हेमटोपोइएटिक अस्थि मज्जा, प्लीहा, लिम्फ नोड्स और अन्य अंगों और ट्यूमर से कांच की स्लाइड पर तैयार किए गए स्मीयर, साथ ही बायोप्सी के दौरान ली गई सामग्री से तैयार किए गए छाप की तैयारी, या जानवरों के शव परीक्षण में अंगों के टुकड़े, पैपेनहाइम के अनुसार दागे गए मिथाइल अल्कोहल में तय किए जाते हैं और 90 के आवर्धन पर एक विसर्जन उद्देश्य के साथ एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

2.2.3. परिणाम प्रसंस्करण

2.2.3.1. अध्ययन का परिणाम सकारात्मक माना जाता है:

ल्यूकेमिया के लिए - यदि रक्त स्मीयरों में 3% से अधिक और खराब विभेदित माता-पिता (प्रोलिम्फोसाइट्स, लिम्फोब्लास्ट्स, मायलोब्लास्ट्स) या ट्यूमर कोशिकाओं के हेमटोपोइएटिक अंगों में 10% से अधिक पाए जाते हैं सामान्यलिम्फोसाइटों की पूर्ण संख्या;

ल्यूकेमिया के एक खराब रूप से विभेदित रूप के लिए - जब पैतृक, खराब विभेदित कोशिकाओं के मैक्रो-, मेसो- और लिम्फोब्लास्ट्स और प्रोलिम्फोसाइटों के माइक्रोजेनरेशन का बढ़ा हुआ प्रतिशत हेमटोपोइएटिक अंगों के हेमोग्राम और साइटोग्राम में पाया जाता है;

लिम्फोइड ल्यूकेमिया के लिए - यदि रक्त स्मीयरों, प्लीहा, लिम्फ नोड्स, अस्थि मज्जा (लिम्फोइड मेटाप्लासिया) और अन्य अंगों में परिपक्वता की बदलती डिग्री (प्रोलिम्फोसाइट्स और लिम्फोब्लास्ट) की लिम्फोइड श्रृंखला की कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि देखी जाती है;

हेमटोसारकोमा (परिपक्वता की विभिन्न डिग्री के लिम्फोसारकोमा) पर - यदि एटिपिकल (ट्यूमर) कोशिकाएं हेमोग्राम और साइटोग्राम में प्रबल होती हैं, जो आकार, आकार, संरचना में सामान्य से भिन्न होती हैं और ट्यूमर बनाने वाली कोशिकाओं के समान होती हैं;

लिम्फोग्रानुलोमैटोसिस पर - जब लिम्फोसाइटोसिस लिम्फ नोड्स से तैयारी में रक्त स्मीयरों में स्थापित होता है - लिम्फोइड हाइपरप्लासिया, उनमें ईोसिनोफिल, न्यूट्रोफिल, बेसोफिल, फाइब्रोब्लास्ट, प्लास्मेटिक, एटिपिकल, अविभाजित और विशाल बेरेज़ोव्स्की-स्टर्नबर्ग कोशिकाओं का पता लगाने के साथ।

2.3. सीरोलॉजिकल विधि

विधि का सार इम्युनोडिफ्यूजन रिएक्शन (आरआईडी) का उपयोग करके जानवरों के रक्त सीरम में गोजातीय ओंकोर्नवायरस टाइप सी एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने में निहित है।

2.3.1. उपकरण और सामग्री

2.3.1.1. अनुसंधान उपयोग के लिए:

जैविक पेट्री डिश;

पी एच मीटर;

छेद बनाने के लिए पंच;

50 डिग्री सेल्सियस या अधिक का ताप तापमान प्रदान करने वाला पानी का स्नान;

बफर समाधान, पीएच 7.2;

GOST 17206-71 के अनुसार शुद्ध अगर;

डबल एंटीजन, मवेशियों में ग्लाइकोप्रोटीन (जीपी) और पॉलीपेप्टाइड (पी 24) ओंकोर्नवायरस टाइप सी के एंटीजन से मिलकर बनता है।

एंटीजन को माइनस 20 डिग्री सेल्सियस या लियोफिलाइज्ड पर संग्रहित किया जाता है।

आरआईडी सेट करने से पहले, तैयार एंटीजन की तुलना विशिष्टता और गतिविधि के लिए परीक्षण किए गए मानक एंटीजन से की जाती है;

RID में 1:16 से 1:32 तक GP प्रतिजन के प्रति एंटीबॉडी के अनुमापांक के साथ अवक्षेपित प्रतिरक्षी के साथ सीरम धनात्मक। सीरम प्राकृतिक या प्रयोगात्मक रूप से संक्रमित मवेशियों या भेड़ से प्राप्त किया जाता है;

सीरम नियंत्रण नकारात्मक।

2.3.2. अध्ययन की तैयारी

2.3.2.1. फ्लैट ग्लास, पेट्री डिश या प्लेट पर 2-3 मिमी मोटी एक समान परत में पिघला हुआ 0.8% अगर घोल लगाया जाता है। आगर के जमने के बाद, कुओं को एक विशेष मोहर के साथ बनाया जाता है, जिससे उनके बीच दरारें बनने और डिश के नीचे से अगर की टुकड़ी को रोका जा सके। यदि रिएक्शन सेट होने से पहले कुओं में तरल जमा हो जाता है, तो उसे हटा दिया जाता है। उनके गठन के तुरंत बाद इम्यूनोडिफ्यूजन के लिए कुओं को अगर परत के नीचे एंटीजन या सीरम के प्रवेश को रोकने के लिए अगर के साथ डाला जाता है।

2.3.3. अनुसंधान का संचालन

2.3.3.1. प्रतिजन और नियंत्रण सीरम ड्राइंग के अनुसार कुओं में योगदान करते हैं। एंटीजन (ए) को केंद्रीय कुएं में पेश किया जाता है, दो व्यास के विपरीत कुएं नियंत्रण सीरम (सीएस) से भरे होते हैं। शेष चार परिधीय कुएं (1, 2, 3, 4) टेस्ट सीरा से भरे हुए हैं। जिस बिंदु पर परीक्षण किए गए सीरा वाले कुओं को क्रमांकित किया जाता है, वह पकवान के ऊपरी भाग के जेल में निशान होता है।

अगर जेल (आरआईडी) में इम्यूनोडिफ्यूजन की प्रतिक्रिया की स्थापना और मूल्यांकन के लिए योजना

1 - नकारात्मक प्रतिक्रिया सीरम; 2 - सकारात्मक प्रतिक्रिया सीरम; 3 - कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया सीरम; 4 - वर्षा की दूसरी पंक्ति के साथ सकारात्मक रूप से प्रतिक्रिया करने वाला सीरम; 5 - तेजी से सकारात्मक प्रतिक्रिया सीरम; 6 - गैर-विशिष्ट वर्षा रेखा के साथ सकारात्मक रूप से प्रतिक्रिया करने वाला सीरम; 7 - एक गैर-विशिष्ट वर्षा रेखा के साथ नकारात्मक रूप से प्रतिक्रिया करने वाला सीरम; 8 - ओपेलेसेंस ज़ोन के साथ नकारात्मक रूप से प्रतिक्रिया करने वाला सीरम; ए - मवेशियों में ओंकोर्नवायरस एंटीजन; सीएस - गोजातीय ओंकोर्नवायरस के ग्लाइकोप्रोटीन प्रतिजन के खिलाफ नियंत्रण सीरम

बैक्टीरिया और अन्य पदार्थों के साथ अभिकर्मकों और सीरा के संदूषण को रोकने के दौरान, कुओं में घटकों को पेश करने के लिए बाँझ पिपेट का उपयोग किया जाता है। कुओं को तब तक भरा जाता है जब तक मेनिस्कस गायब नहीं हो जाता। सभी कुओं को भरने के बाद बर्तनों को ढक्कन से बंद कर दिया जाता है और 18 से 27 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक नम कक्ष में संग्रहीत किया जाता है।


48-72 घंटों के बाद प्रतिक्रिया को ध्यान में रखा जाता है। कप को एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ देखा जाता है, जो प्रकाशक के केंद्रित बीम को कप के नीचे 30-45 डिग्री के कोण पर निर्देशित करता है। प्रतिक्रिया का मूल्यांकन अवक्षेप की नियंत्रण रेखा के विरुद्ध किया जाता है। यदि यह अनुपस्थित या कमजोर रूप से व्यक्त किया गया है, तो प्रतिक्रिया को विफलता माना जाता है और इसे दोहराया जाना चाहिए। नियंत्रण सीरम और प्रतिजन द्वारा बनाई गई वर्षा रेखा स्पष्ट, सीधी होनी चाहिए, जिसके सिरे परीक्षण किए गए सीरा के साथ कुओं तक पहुंचें, और कुओं (ए और सीएस) से समान दूरी पर स्थित हों।

2.3.4. परिणाम प्रसंस्करण

2.3.4.1. ऑनकोर्नवायरस एंटीजन के खिलाफ विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति और टिटर के आधार पर, सेरा को सकारात्मक, नकारात्मक और संदिग्ध प्रतिक्रिया के रूप में वर्गीकृत किया जाता है।

सीरम को सकारात्मक रूप से प्रतिक्रिया करने वाला माना जाता है:

यदि एंटीजन और परीक्षण सीरम के साथ कुओं के बीच एक वर्षा बैंड बनता है, जो नियंत्रण रेखा से जुड़ता है, स्थिति 2 (चित्र देखें);

यदि सीरम और प्रतिजन के साथ कुओं के बीच कोई वर्षा रेखा नहीं है, लेकिन नियंत्रण रेखा परीक्षण सीरम के साथ कुएं के पास एक मोड़ बनाती है, जो प्रतिजन के साथ कुएं की ओर निर्देशित होती है, स्थिति 3 ;

यदि वर्षा की दूसरी पंक्ति बनती है, जो परीक्षण सीरम के साथ कुएं के करीब स्थित है और एंटीबॉडी (पी 24) के सीरम में उपस्थिति को इंगित करता है जो गोजातीय ओंकोर्नवायरस प्रकार सी के दूसरे एंटीजन के खिलाफ उपजी है, - स्थिति 4 ;

यदि परीक्षण सीरम के साथ कुएं की तरफ नियंत्रण रेखा को काफी छोटा कर दिया गया है और एंटीजन के साथ कुएं की ओर धुंधली मोड़ है या एंटीजन के साथ कुएं के बहुत करीब स्थित है - स्थिति 5 ;

टिप्पणी। यदि इस तरह के सीरम को 1:4 या 1:8 के अनुपात में पतला किया जाए तो एक स्पष्ट रेखा बनती है;

यदि एक गैर-विशिष्ट वर्षा रेखा बन गई है - स्थिति 6 .

सीरम को नकारात्मक प्रतिक्रिया करने वाला माना जाता है:

यदि नियंत्रण वर्षा रेखा बिना झुके परीक्षण सीरम के साथ कुएं तक जारी रहती है या नियंत्रण सीरम के साथ कुएं की ओर थोड़ा सा झुकता है - स्थिति 1 ;

यदि एक गैर-विशिष्ट वर्षा रेखा बन गई है - स्थिति 7 ; जबकि यह नियंत्रण रेखा को काटती है।

सीरम को संदिग्ध रूप से प्रतिक्रियाशील माना जाता है यदि गैर-विशिष्ट वर्षा रेखा की उपस्थिति के कारण नियंत्रण वर्षा रेखा खराब दिखाई देती है। इस मामले में, इस जानवर से फिर से रक्त लिया जाता है और सीरम का विश्लेषण किया जाता है।

यदि अध्ययन के बीच 1 महीने के अंतराल के साथ दो बार एक संदिग्ध प्रतिक्रिया दर्ज की गई, तो सीरम को सकारात्मक प्रतिक्रिया देने वाला माना जाता है।

एक अस्पष्ट प्रतिक्रिया नकारात्मक-प्रतिक्रिया वाले सीरम के साथ अग्र परत के नीचे सकारात्मक-प्रतिक्रिया वाले सीरम के रिसाव या नकारात्मक-प्रतिक्रिया वाले सीरम के नमूने के संदूषण के कारण हो सकती है - सकारात्मक। इस मामले में, अध्ययन दोहराया जाता है।

2.4. ऊतकीय विधि

विधि का सार ल्यूकेमिया के रोगियों में पशु वृद्धि (प्रसार) का पता लगाने में निहित है, जो हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं की सामान्य परिपक्वता और भेदभाव को बाधित करता है, दोनों हेमटोपोइएटिक अंगों (अस्थि मज्जा, प्लीहा, लिम्फ नोड्स) में, और में संयोजी ऊतकअन्य अंग।

2.4.1. उपकरण, सामग्री और अभिकर्मक

2.4.1.1. अनुसंधान उपयोग के लिए:

पैराफिन वर्गों के लिए माइक्रोटोम;

सेलोइडिन वर्गों के लिए माइक्रोटोम:

GOST 8284-78 के अनुसार माइक्रोस्कोप;

GOST 9284-75 के अनुसार स्लाइड और कवरस्लिप;

लकड़ी या अन्य सामग्री के ब्लॉक;

थर्मोस्टेट 80 डिग्री सेल्सियस का तापमान नियंत्रण प्रदान करता है;

58 डिग्री सेल्सियस के पिघलने बिंदु के साथ पैराफिन;

फॉर्मलाडेहाइड 8-10%, तटस्थ, जलीय घोल;

GOST 5962-67 के अनुसार संशोधित एथिल अल्कोहल;

सेलोइडिन: 1:1 के अनुपात में ईथर सल्फेट के साथ मानक में 2-3, 4-5 और 8-10% समाधान;

GOST 20015-74 * के अनुसार क्लोरोफॉर्म;
________________
* रूसी संघ के क्षेत्र में, GOST 20015-88 लागू होता है। - डेटाबेस निर्माता का नोट।

गोस्ट 2290-76 के अनुसार प्राथमिकी बाम;

GOST 9949-76 के अनुसार xylene;

GOST 3118-77 के अनुसार हाइड्रोक्लोरिक एसिड, 1% शराब समाधान;

ईओसिन, 0.5% समाधान या हेमटॉक्सिलिन 10% समाधान;

GOST 4461-77 के अनुसार नाइट्रिक एसिड, 5% समाधान;

ईथर सल्फेट;

कार्बो-ज़ाइलीन।

2.4.2. अध्ययन की तैयारी

2.4.2.1. अंगों के चयनित नमूने 48 घंटे के लिए फॉर्मलाडेहाइड में तय किए जाते हैं और फिर बहते पानी में 10-24 घंटे के लिए धोए जाते हैं। फिर, 3 माइक्रोन मोटी और 1.5-2.5 सेमी क्षेत्र में प्लेटों को अंगों के टुकड़ों से काट दिया जाता है, जिन्हें क्रमिक रूप से अंदर रखा जाता है एथिल अल्कोहोल 70%, 80%, 96% की एकाग्रता के साथ।

प्रत्येक संकेतित एकाग्रता की शराब में, निर्जलीकरण 24 घंटे 15 से 20 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रहता है।

2.4.2.2. सेलोइडिन वर्गों को तैयार करने और दागने के लिए, रोग संबंधी सामग्री के निर्जलित टुकड़े सेलोइडिन में एम्बेडेड होते हैं। सेलॉइडिन के घोल से निकाले गए अंगों के टुकड़ों को लकड़ी या अन्य सामग्री के ब्लॉक पर चिपका दिया जाता है, सुखाया जाता है और 70% अल्कोहल के साथ जार में रखा जाता है। सेलॉइडिन खंड 5-10 माइक्रोन मोटे अंगों के टुकड़ों से तैयार किए जाते हैं जो ब्लॉकों पर चिपके होते हैं और हेमटॉक्सिलिन-एओसिन या अन्य रंगों से सना हुआ होता है, एक बाम में संलग्न होता है और एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है। सेलोइडिन के बजाय, पैराफिन अनुभाग तैयार किए जा सकते हैं।

2.4.2.3. पैराफिन वर्गों की तैयारी और धुंधला होने के लिए, खंड 2.4.2.1 के अनुसार निर्जलित अंगों के टुकड़े पैराफिन में एम्बेडेड होते हैं । पैराफिन माइक्रोटोम का उपयोग करके पैराफिन ब्लॉकों से 3-5 माइक्रोन मोटी धाराएं तैयार की जाती हैं, जिन्हें पिघलने के लिए गर्म पानी में रखा जाता है। फिर वर्गों को कांच की स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, 37-40 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टैट में सुखाया जाता है और हेमटॉक्सिलिन-एओसिन या अन्य डाई के साथ दाग दिया जाता है।

2.4.3. अनुसंधान का संचालन

तैयार वर्गों को प्राकृतिक या कृत्रिम प्रकाश में माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। 10 के आवर्धन के साथ एक ऐपिस और 10 के आवर्धन के साथ एक लेंस के साथ, अध्ययन के तहत अंगों की सामान्य संरचना निर्धारित की जाती है, घुसपैठ की प्रक्रियाओं (की स्थिति) के परिणामस्वरूप इसके व्यक्तिगत वर्गों में ऊतक में परिवर्तन को ध्यान में रखते हुए। रोम, प्लीहा और लिम्फ नोड्स में इंटरफॉलिक्युलर ज़ोन, वाहिकाओं के लुमेन में कोशिकाओं की उपस्थिति, पैरेन्काइमा और अंगों के इंटरस्टिटियम और आदि)।

20 के आवर्धन के साथ एक ऐपिस और 40 के आवर्धन के साथ एक लेंस के साथ, परिवर्तनों का विवरण प्रकट होता है, प्रोलिफ़ेरेटिंग कोशिकाओं की प्रकृति (प्रकार, भेदभाव की डिग्री, परिपक्वता) और तीव्रता (गंभीरता) पर ध्यान देते हुए हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन। उसी समय, एक गैर-ल्यूकेमिक प्रकृति के सहवर्ती रोगों की उपस्थिति को विभेदक निदान या संकेतों का संचालन करने के लिए निर्धारित किया जाता है जो कंकाल की मांसपेशियों, हृदय में अंतर्निहित बीमारी (एडिमा, डिस्ट्रोफी, नेक्रोसिस, रक्तस्राव, आदि) को बढ़ाते हैं। जिगर, गुर्दे और अन्य अंग)।

2.4.4. परिणाम प्रसंस्करण

विश्लेषण के परिणाम सकारात्मक माने जाते हैं:

लिम्फोइड ल्यूकेमिया पर - यदि लिम्फोइड श्रृंखला की कोशिकाओं द्वारा फैलने वाली घुसपैठ के कारण प्लीहा और लिम्फ नोड्स में पैटर्न का पूर्ण क्षरण देखा जाता है, जिनमें से मुख्य रूप से परिपक्व लिम्फोसाइट्स का पता लगाया जाता है, तो प्रोलिम्फोसाइट्स, लिम्फोब्लास्ट कम मात्रा में पाए जाते हैं, जिनमें से जालीदार कोशिकाओं को कभी-कभी नोट किया जाता है;

अस्थि मज्जा में, स्ट्रोमा को संरक्षित किया जाता है, बीम के महत्वपूर्ण पतलेपन और पुनर्जीवन का पता चलता है, लिम्फोसाइटों के समूहों को फॉसी के रूप में स्थित किया जा सकता है या सभी अस्थि मज्जा रिक्त स्थान (लिम्फोइड मेटाप्लासिया) को भरते हुए फैलाया जा सकता है; गुर्दे, यकृत, हृदय, एबॉसम और अन्य अंगों में, केशिकाओं के लुमेन में लिम्फोसाइटों का संचय और अंतरालीय ऊतक के लिम्फोइड कोशिकाओं की घुसपैठ का आमतौर पर पता लगाया जाता है;

खराब विभेदित ल्यूकेमिया (हेमोसाइटोब्लास्टोसिस) के लिए - यदि अस्थि मज्जा, प्लीहा, लिम्फ नोड्स और अन्य अंगों में फोकल और फैलाना प्रोलिफेरेट्स देखे जाते हैं, जिनमें से सेलुलर संरचना को हेमोसाइटोब्लास्ट (पैतृक सेल) जैसे अविभाजित या खराब विभेदित कोशिकाओं द्वारा दर्शाया जाता है;

माइलॉयड ल्यूकेमिया के लिए - यदि ग्रैनुलोसाइटिक श्रृंखला के अपरिपक्व तत्व, मेगाकारियोसाइट्स, हेमोसाइटोब्लास्ट प्रकार की कोशिकाएं, जालीदार कोशिकाएं, विखंडन और अर्जीरोफिलिक फाइबर का क्षय तिल्ली में पाया जाता है, तो ग्रैनुलोसाइटिक श्रृंखला की परिपक्व और अपरिपक्व कोशिकाओं का संचय हड्डी में पाया जाता है। मज्जा; लिम्फ नोड्स, यकृत, गुर्दे, फेफड़े और अन्य अंगों में, माइलॉयड तत्वों की फोकल फैलाना वृद्धि देखी जाती है;

लिम्फोसारकोमा पर (खराब विभेदित लिम्फोब्लास्टिक, लिम्फोसाइटिक, हिस्टियोसाइटिक) - यदि लिम्फ नोड्स, पाचन अंगों, प्रजनन अंगों, हृदय, कंकाल की मांसपेशियों, अन्य अंगों और ऊतकों में, लिम्फोइड प्रकार के अविभाजित या खराब विभेदित कोशिकाओं से ट्यूमर का विकास नोट किया जाता है ( प्लीहा और अस्थि मज्जा नहीं बदले जाते हैं);

लिम्फोग्रानुलोमैटोसिस के लिए - यदि लिम्फोइड कोशिकाओं के हाइपरप्लासिया या पॉलीमॉर्फिक सेल प्रसार, स्क्लेरोटिक परिवर्तन और लिम्फ नोड्स, प्लीहा, यकृत और अन्य अंगों में परिगलन का पता लगाया जाता है; जालीदार प्रकार की बहुरूपी कोशिकाओं में, बेरेज़ोव्स्की-स्टर्नबर्ग प्रकार की बहु-नाभिकीय विशाल कोशिकाएँ, प्लाज्मा कोशिकाएँ, ईोसिनोफिल और न्यूट्रोफिल परिपक्वता की अलग-अलग डिग्री के साथ-साथ फ़ाइब्रोब्लास्ट का भी पता लगाया जाता है।

2.5. एलिसा विधि

विधि का सार एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटी-प्रजाति एंटीबॉडी के साथ परीक्षण सीरम के ऊष्मायन के दौरान प्लेट की सतह पर एंटीजन द्वारा एंटीवायरल एंटीबॉडी के सोखने में निहित है, इसके बाद सब्सट्रेट का संशोधन होता है।

2.5.1. उपकरण, सामग्री, अभिकर्मक

1.5 विलुप्त होने वाली इकाइयों की न्यूनतम पढ़ने की सीमा और परिणामों के स्वचालित पंजीकरण के साथ एकल या बहु-चैनल फोटोमीटर।

स्वचालित या अर्ध-स्वचालित प्लेट धोने के उपकरण।

तापमान प्रदान करने वाला थर्मोस्टेट (37±0,5) डिग्री सेल्सियस।

Micropipettes सिंगल-चैनल ऑटोमैटिक।

Micropipettes आठ- या बारह-चैनल स्वचालित।

96 कुओं के साथ माइक्रोटिटर प्लास्टिक प्लेट।

GOST 1770-74 के अनुसार 500 सेमी की क्षमता वाला रासायनिक चश्मा।
.

पिपेट ने GOST 20292-71 के अनुसार 1 और 10 सेमी3 की क्षमता के साथ स्नातक किया।

बफर समाधान 8.8-9.6 के पीएच के साथ कार्बोनेट है।

पीएच 7.2-7.4 के साथ फिजियोलॉजिकल फॉस्फेट बफर समाधान जिसमें ट्वीन 20 या 80 (वाशिंग सॉल्यूशन) होता है।

विलायक - एक अक्रिय प्रोटीन युक्त धोने का घोल।

एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) के लिए बीएलवी एंटीजन एक वीएलवी-संक्रमित लैम्ब्स प्लीहा सेल कल्चर (एफएलएस) या लैम्ब्स भ्रूण किडनी (एफएलके) के कल्चर फ्लूइड से तैयार किया जाता है, जिसमें वायरस घटक जीपी 51 और पी 24 होते हैं, जो कार्बोनेट बफर सॉल्यूशन में पतला होता है।

सीरम नियंत्रण सकारात्मक, एक विलायक में पतला।

सीरम नियंत्रण नकारात्मक, जो एक विलायक में पतला कम से कम 10 नकारात्मक गोजातीय सीरा का मिश्रण है।

संयुग्म - गोजातीय इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एंटीबॉडी, पेरोक्सीडेज या अन्य एंजाइम के साथ लेबल, एक विलायक में पतला।

गोजातीय रक्त से सीरम का परीक्षण करें।

एंजाइमी प्रतिक्रिया के लिए सब्सट्रेट।

2.5.2. अनुसंधान का संचालन

माइक्रोटिटर प्लेट (पैनल) के कुओं में 0.05 या 0.1 या 0.2 मिली प्रतिजन घोल मिलाया जाता है। प्लेट को बंद कर दिया जाता है और एक आर्द्र कक्ष में प्लस 4 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 18 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

उसके बाद, प्लेट को चार बार फिजियोलॉजिकल फॉस्फेट बफर सॉल्यूशन से धोया जाता है ताकि कुएं पूरी तरह से भर जाएं, 3 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया जाए और फिर घोल को कुओं से सावधानीपूर्वक हटा दिया जाए।

टेस्ट सीरा के प्रारंभिक तनुकरण तैयार करें ।

प्रारंभिक तनुकरण में परीक्षण सीरा को माइक्रोटिटर प्लेट के दो निकटवर्ती कुओं के समानांतर 0.05 या 0.1 या 0.2 सेमी3 की मात्रा में जोड़ा जाता है। इसी प्रकार, प्रत्येक प्लेट में तनु नियंत्रण धनात्मक और ऋणात्मक सेरा मिलाया जाता है। प्रत्येक प्लेट पर केवल विलायक (कोई सीरम नहीं) से भरे कुछ कुओं को छोड़ दें। प्लेट पर विलायक कुओं की संख्या फोटोमीटर के डिजाइन द्वारा निर्धारित की जाती है और इसका उपयोग उपकरण पैमाने की शून्य स्थिति निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

प्लेट को बंद कर दिया जाता है और 60-120 मिनट के लिए नम कक्ष में 20 से 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है।



संयुग्म समाधान के 0.05 या 0.1 या 0.2 मिलीलीटर को कुओं में जोड़ा जाता है, प्लेटों को बंद कर दिया जाता है और 60-120 मिनट के लिए नम कक्ष में 20 से 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है।

प्लेट को धुलाई के घोल से चार बार धोएं ।

0.05 या 0.1 या 0.2 सेमी सब्सट्रेट समाधान प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है और 50-60 मिनट के लिए 20 से 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है। यदि आवश्यक हो, तो प्रतिक्रिया को रोकने के लिए कुओं में एक कार्बोनेट बफर समाधान जोड़ा जाता है, और प्रत्येक कुएं में ऑप्टिकल घनत्व को चयनित सब्सट्रेट की तरंग दैर्ध्य विशेषता पर एक फोटोमीटर पर मापा जाता है।

2.5.3. परिणाम प्रसंस्करण

परिणाम को सकारात्मक माना जाता है यदि दोनों कुओं में परीक्षण नमूने का ऑप्टिकल घनत्व उपयुक्त कमजोर पड़ने में नकारात्मक नमूने के लिए ऑप्टिकल घनत्व के अंकगणितीय माध्य का दो या अधिक गुना है।

2.5-2.5.3। (अतिरिक्त रूप से प्रस्तुत, रेव। एन 1)।

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एम.: मानकों का प्रकाशन गृह, 1982



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ब्लड कैंसर एक गंभीर कैंसर है जो रक्त कोशिकाओं को प्रभावित करता है। तीव्र ल्यूकेमिया में, अस्थि मज्जा पैदा करता है और जमा होता है एक बड़ी संख्या कीअपरिपक्व लिम्फोसाइट्स जो अंततः स्वस्थ कोशिकाओं को प्रतिस्थापित करते हैं। इस प्रकार, ट्यूमर संरचनाएं पर्याप्त लाल रक्त कोशिकाओं, प्लेटलेट्स और सफेद रक्त कोशिकाओं का उत्पादन करने की क्षमता को कम करती हैं। ल्यूकेमिया का निदान कैंसर के प्रकार, शरीर को नुकसान की डिग्री और उपचार के तरीकों को निर्धारित करने में मदद करता है।

ल्यूकेमिया सिर्फ एक बीमारी नहीं है। ल्यूकेमिया को एक विशिष्ट प्रकार के हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं के ट्यूमरस नियोप्लाज्म में परिवर्तन की विशेषता है। इसके आधार पर कि कौन से अंश घातक हो जाते हैं, रोग को प्रकारों में विभाजित किया जाता है। उदाहरण के लिए, यदि शरीर में अपरिपक्व लिम्फोसाइटों के परिवर्तन की प्रक्रिया होने लगती है, तो कैंसर को लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया कहा जाता है। और ग्रैनुलोसाइटिक प्रकार के ल्यूकोसाइट्स की परिपक्वता के उल्लंघन में, मायलोइड ल्यूकेमिया विकसित होता है, आदि।

ल्यूकेमिया या हेमोब्लास्टोस तीव्र या जीर्ण होते हैं। पहले मामले में, रोगियों को तत्काल आवश्यकता होती है स्वास्थ्य देखभाल, इसलिये तीव्र ल्यूकेमियाबहुत तेज और कठिन दौड़ता है। इस अवधि के दौरान, रक्त में बड़ी संख्या में अपरिपक्व कोशिकाएं दिखाई देती हैं। और कैंसर के पुराने पाठ्यक्रम में, अधिक परिपक्व निकायों की मात्रा में वृद्धि होती है।

ल्यूकेमिया सबसे आम है बचपनऔर इसे काफी सामान्य बीमारी नहीं माना जाता है। रोगियों में ल्यूकोसाइट्स की हार के साथ, निम्नलिखित लक्षण दिखाई देते हैं:

• रक्तस्राव (बिंदु या व्यापक);
• तेजी से थकान;
• पीली त्वचा;
• बार-बार संक्रमण।

लेकिन ऐसे लक्षण अन्य गंभीर बीमारियों का संकेत हो सकते हैं। इसलिए, रक्त कोशिकाओं के ऑन्कोलॉजिकल घावों की पहचान करने के लिए, विभिन्न अध्ययन करना आवश्यक है।

यदि प्रयोगशाला परीक्षण निम्नलिखित परिणाम दिखाते हैं तो कैंसर का निदान किया जा सकता है:

• अपरिपक्व विस्फोट सभी अस्थि मज्जा कोशिकाओं का 30% से अधिक बनाते हैं;
• यदि हेमटोपोइजिस के 50% से अधिक एरिथ्रोसाइट स्प्राउट्स हैं, लेकिन गैर-एरिथ्रोइड कोशिकाओं में, विस्फोट तत्वों की मात्रा के कम से कम तीस प्रतिशत पर कब्जा कर लेते हैं;
• जब अस्थि मज्जा में अधिक एटिपिकल प्रोमायलोसाइट्स होते हैं।

यदि कुछ माइलॉयड विस्फोट (5-30%) होते हैं, तो ल्यूकेमिया का निदान नहीं किया जाता है, और संकेतकों को माइलोडिसप्लास्टिक सिंड्रोम का संकेत माना जाता है। पहले, इस तरह के परिणामों के साथ तीव्र ल्यूकेमिया के निदान को कम प्रतिशत ट्यूमर के रूप में वर्गीकृत किया गया था। जब ब्लास्ट कोशिकाएं प्रकृति में लिम्फोइड होती हैं, तो मस्तिष्क से अन्य अंगों में फैलने के चरण में लिम्फोमा को बाहर करना आवश्यक होता है।

यह रोग धीरे-धीरे विकसित होता है, इसलिए इसकी अभिव्यक्तियाँ लंबे समय तक ध्यान देने योग्य नहीं होती हैं। एक घातक ट्यूमर का पुराना कोर्स एक प्रणालीगत विकृति है जिसमें कोशिका परिपक्वता की प्रक्रिया बाधित होती है। ल्यूकेमिया को कैंसर निकायों के भेदभाव से अलग किया जाता है जो बहुत लंबे समय तक विकसित होते हैं।

रोग के पुराने पाठ्यक्रम को 2 चरणों में विभाजित किया गया है:

1. सौम्य, ट्यूमर कोशिका के एक क्लोन के साथ;
2. घातक, माध्यमिक क्लोन के साथ, जो जल्दी से आगे बढ़ता है और कई विस्फोटों के गठन की विशेषता है।

इसके अलावा, ट्यूमर लिम्फोसाइटिक, मायलोसाइटिक और बालों वाली कोशिका है।

क्रोनिक ल्यूकेमिया का निदान निम्नलिखित विधियों द्वारा किया जाता है:

• रक्त परीक्षण - ल्यूकोसाइट्स की संख्या में वृद्धि और, परिणामस्वरूप, अन्य अंशों में कमी;
• जैव रासायनिक विश्लेषण - रोग की एक निश्चित अवधि के लिए विभिन्न शरीर प्रणालियों और उनकी कार्यक्षमता के संकेतक;
• अस्थि मज्जा का पंचर - निदान को स्पष्ट करने और उपचार की विधि निर्धारित करने के लिए किया जाता है;
• स्पाइनल पंचर - द्रव में ट्यूमर कोशिकाओं की पहचान करने और कीमोथेरेपी योजना तैयार करने के लिए उपयोग किया जाता है।

कोशिकीय अध्ययनों का उपयोग करके क्रोनिक ल्यूकेमिया का भी निदान किया जाता है - साइटोकेमिस्ट्री, साइटोजेनेटिक्स, इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री, साइटोमेट्री, आदि। कुछ मामलों में, हड्डियों, जोड़ों और लिम्फ नोड्स को नुकसान की डिग्री को समझने के लिए उन्हें छाती के एक्स-रे के लिए भेजा जाता है। यदि उदर गुहा में लिम्फ नोड्स की जांच करना आवश्यक है, तो रोगी को एमआरआई दिया जाता है। और सिस्ट को ट्यूमर से अलग करने के लिए अल्ट्रासाउंड किया जाता है।

ल्यूकेमिया का प्रयोगशाला निदान: विस्तृत शोध संकेतक

परिधीय रक्त के विश्लेषण में एक ट्यूमर प्रक्रिया के साथ, निम्नलिखित परिवर्तन दिखाई देंगे:

• नॉर्मोक्रोमिक नॉरमोसाइटिक एनीमिया;
• न्यूट्रोपेनिया;
• लिम्फोसाइटोसिस;
• थ्रोम्बोसाइटोपेनिया;
• परिपक्वता के मध्यवर्ती रूपों के बिना परिपक्व विस्फोट;
• अज़ुरोफिलिक कणिकाओं।

रक्त परीक्षण में, ल्यूकोसाइट्स की संख्या भिन्न हो सकती है। इस तथ्य के बावजूद कि उनकी संख्या बढ़ गई है या सामान्य है, निदान करते समय इन कोशिकाओं के संकेतकों को ध्यान में नहीं रखा जाता है।

अस्थि मज्जा पंचर के बाद, तीव्र या पुरानी ल्यूकेमिया का सटीक निदान करना संभव है। इसके अलावा, यह शोध पद्धति है जो ट्यूमर के प्रकार (रूपात्मक, साइटोजेनेटिक या इम्यूनोफेनोटाइपिक) की पहचान करना संभव बनाती है। मस्तिष्क में प्रवेश करना मुश्किल हो सकता है क्योंकि कुछ रोगियों में, कैंसर प्रक्रिया के परिणामस्वरूप, रेशेदार संरचनाओं की मात्रा बढ़ जाती है और हेमटोपोइजिस के दबे हुए कार्य के कारण तत्व समाप्त हो जाते हैं।

मायलोग्राम के दौरान, निम्नलिखित संकेतकों द्वारा तीव्र ल्यूकेमिया का पता लगाया जा सकता है:

• 5% से अधिक ब्लास्ट सेल;
• ल्यूकोसाइट्स की परिपक्वता के मध्यवर्ती रूपों में वृद्धि;
• लिम्फोसाइटोसिस;
• धमाकों की आकृति विज्ञान ल्यूकेमिया के प्रकार के अनुरूप है;
• लाल रोगाणु का निषेध, जो हेमटोपोइजिस की प्रक्रिया के लिए जिम्मेदार है;
• मेगाकारियोसाइट्स की अनुपस्थिति।

साइटोकेमिकल अध्ययनों के परिणामों के अनुसार, विभिन्न विस्फोटों के लिए विशिष्ट एंजाइमों की पहचान की जा सकती है। साइटोजेनेटिक डेटा कोशिकाओं के गुणसूत्र संबंधी असामान्यताओं को निर्धारित करते हैं और कैंसर के पाठ्यक्रम की भविष्यवाणी करना संभव बनाते हैं।

धमाकों की इम्यूनोफेनोटाइपिंग से तीव्र लिम्फोब्लास्टिक या मायलोइड ल्यूकेमिया का निदान करना संभव हो जाता है। यह विधि बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि रोग के दो रूपों का उपचार अलग-अलग होता है। इम्यूनोफेनोटाइपिंग के दौरान, यह पता लगाना संभव है कि शरीर में सीडी मार्कर हैं या नहीं।

प्रयोगशाला निदानल्यूकेमिया निम्नलिखित प्राथमिक तरीकों से किया जाना चाहिए:

• मस्तिष्कमेरु द्रव का अध्ययन (बढ़ी हुई साइटोसिस निर्धारित करने के लिए);
• छाती का एक्स-रे (फेफड़ों के ऊतकों में ल्यूकेमिड की उपस्थिति, इंट्राथोरेसिक लिम्फ नोड्स में वृद्धि);
• जैव रसायन के लिए रक्त परीक्षण;
• ईईजी, इको-केजी, ईसीजी (महत्वपूर्ण अंगों के कार्यात्मक विकारों का पता लगाएं);
• अल्ट्रासाउंड (यकृत और प्लीहा में घुसपैठ की उपस्थिति का निर्धारण)।

चूंकि कीमोथेरेपी में ऐसी दवाएं होती हैं जो यकृत, हृदय और गुर्दे के कामकाज को बाधित कर सकती हैं, इसे करने से पहले, चिकित्सा शुरू करने से पहले रोगियों की स्वास्थ्य जांच की जानी चाहिए। साथ ही, पूरे उपचार के दौरान उनकी कार्यक्षमता पर नजर रखी जाती है।

चूंकि उपरोक्त संकेतक, जो रोगी के शरीर में एक संभावित ट्यूमर प्रक्रिया का संकेत देते हैं, किसी अन्य बीमारी का संकेत हो सकता है, निदान करने के लिए निदान करना आवश्यक है। सही कारणरक्त, लिम्फ नोड्स, अस्थि मज्जा, या अन्य अंगों में परिवर्तन।

इसी तरह के लक्षणों में निम्नलिखित विकृति हो सकती है:

• संक्रामक मोनोन्यूक्लियोसिस . इस रोग को बढ़े हुए प्लीहा और बुखार की विशेषता हो सकती है। विश्लेषणों में, परिवर्तित लिम्फोसाइट्स जो धमाकों से मिलते जुलते हैं, पर ध्यान दिया जाएगा। लेकिन संकेतक आमतौर पर अन्य संकेतों की पृष्ठभूमि के खिलाफ होते हैं - टॉन्सिलिटिस, पीलिया, कार्डियोपैथी का कोर्स। रक्त में मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं का निर्धारण किया जाएगा, और एपस्टीन-बार वायरस की प्रतिक्रिया सकारात्मक है।
• एचआईवी संक्रमण . रोग लिम्फैडेनोपैथी की विशेषता है। लेकिन इसे सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए, वे रक्त में वायरल मार्करों की तलाश करते हैं।
• अविकासी खून की कमी . रोग की पहचान पैन्टीटोपेनिया है। अस्थि मज्जा में रूपात्मक परिवर्तन शुरू होते हैं - ऊतक जो हेमटोपोइजिस के लिए जिम्मेदार होते हैं, उन्हें वसायुक्त द्वारा बदल दिया जाता है, विस्फोट अनुपस्थित होते हैं। शरीर पर विषाक्त पदार्थों के संपर्क में आने के बाद यह स्थिति प्रकट हो सकती है।

इसके अलावा, पैन्टीटोपेनिया के साथ उपस्थित हो सकता है नैदानिक ​​परीक्षणयदि रोगी ने हाल ही में जठरांत्र संबंधी मार्ग की सर्जरी की है, जिसके बाद बी 12 की कमी से एनीमिया विकसित होता है। एक अन्य कारक एसएलई सिंड्रोम है, जिसमें रक्त में ल्यूपस कोशिकाएं पाई जाती हैं। उचित उपचार के बाद संकेतक सामान्य हो जाते हैं।

• भड़काऊ प्रक्रियाएं . प्रेडनिसोलोन या इसी तरह की अन्य दवाओं को लेने के बाद रोगियों के लिए ल्यूकेमॉइड प्रतिक्रियाओं का अनुभव करना असामान्य नहीं है। लेकिन ल्यूकेमिया के साथ, ऐसे संकेतक विस्फोट प्रकार के होंगे, और गंभीर सूजन के साथ वे नहीं देखे जाते हैं।

ल्यूकेमिया का निदान करने के लिए, बहुत सारे शोध करना और ल्यूकेमिया को अन्य बीमारियों से अलग करना आवश्यक है। केवल इस मामले में रोगी के लिए एक सटीक निदान करना और कीमोथेरेपी निर्धारित करना संभव है।

लेकिमियाहेमटोपोइएटिक प्रणाली के ट्यूमर रोग हैं। "ल्यूकेमिया" शब्द सामूहिक है। यह हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं से उत्पन्न होने वाले कई नियोप्लाज्म को जोड़ती है। इस मामले में, अस्थि मज्जा मुख्य रूप से प्रभावित होता है।

मूल

ल्यूकेमिया का कोई एक सामान्य कारण नहीं है। कई अलग-अलग कारण पाए गए हैं जो ल्यूकेमिया के विभिन्न रूपों का कारण बनते हैं। कुछ मामलों में, यह एक वायरस का प्रभाव है, दूसरों में, आयनकारी विकिरण, और अन्य में, रसायनों का। ये सभी और कई अन्य कारक हेमटोपोइएटिक कोशिकाओं (उत्परिवर्तन) के आनुवंशिक तंत्र के गुणों में क्षति और परिवर्तन का कारण बनते हैं। क्षतिग्रस्त कोशिका से एक ट्यूमर विकसित होता है। ट्यूमर एक क्लोन है, जो एक परिवर्तित कोशिका की संतान है। ट्यूमर की वृद्धि हेमटोपोइएटिक पूर्वज कोशिकाओं से शुरू होती है।

हेमटोपोइएटिक ऊतक मोबाइल है। इसकी कोशिकाओं में अस्थि मज्जा को छोड़कर, रक्तप्रवाह में प्रवेश करने की क्षमता होती है, इसलिए रक्त ट्यूमर बहुत जल्दी मेटास्टेसाइज करते हैं। ल्यूकेमिया कोशिकाएं आमतौर पर अस्थि मज्जा में बनती हैं। पैथोलॉजिकल (एनाप्लास्टिक) कोशिकाएं तेजी से बढ़ती हैं और सामान्य हेमटोपोइजिस के तत्वों को विस्थापित करती हैं। मेटास्टेस मुख्य रूप से हेमटोपोइएटिक अंगों, प्लीहा और लिम्फ नोड्स में होते हैं, इसलिए रोग प्रणालीगत है। इसके अलावा, ट्यूमर कोशिकाओं को अन्य अंगों और ऊतकों में पेश किया जाता है, जहां पैथोलॉजिकल हेमटोपोइजिस के मेटास्टेटिक फॉसी बनते हैं।

2. वर्गीकरण

ल्यूकेमिया का वर्गीकरण ट्यूमर (ट्यूमर सब्सट्रेट) को बनाने वाली कोशिकाओं के गुणों पर आधारित होता है।

ट्यूमर की सेलुलर संरचना के अनुसार, सभी ल्यूकेमिया को 2 समूहों में विभाजित किया जाता है: तीव्र और जीर्ण। यह विभाजन नैदानिक ​​नहीं है, अर्थात, रोग के पाठ्यक्रम को नहीं दर्शाता है, लेकिन रूपात्मक - ट्यूमर कोशिकाओं की संरचनात्मक विशेषताओं के आधार पर।

तीव्र ल्यूकेमिया का समूह एक सामान्य विशेषता द्वारा एकजुट होता है - ट्यूमर का सब्सट्रेट सबसे कम उम्र की कोशिकाएं होती हैं। ये या तो हेमटोपोइजिस की अग्रदूत कोशिकाएं हैं, या विस्फोट के रूप हैं - हेमटोपोइजिस की व्यक्तिगत पंक्तियों के पूर्वज। हेमटोपोइएटिक योजना के अनुसार, ये कक्षा 2, 3, 4 की कोशिकाएँ हैं।

क्रोनिक ल्यूकेमिया में, ट्यूमर सब्सट्रेट परिपक्व या परिपक्व कोशिकाओं, यानी हेमटोपोइएटिक योजना के वर्ग V और VI द्वारा बनता है।

तीव्र और जीर्ण ल्यूकेमिया के समूहों के भीतर, उन कोशिकाओं के नाम के अनुसार वर्गीकरण किया जाता है जिनसे ट्यूमर की उत्पत्ति हुई थी। इस प्रकार, तीव्र ल्यूकेमिया मायलोब्लास्टिक, प्रोमायलोसाइटिक, मोनोब्लास्टिक, लिम्फोब्लास्टिक, प्लास्मबलास्टिक, एरिथ्रोबलास्टिक, या मेगाकारियोब्लास्टिक हो सकता है यदि ट्यूमर सब्सट्रेट चतुर्थ श्रेणी की कोशिकाएं हैं, और यदि ट्यूमर सब्सट्रेट वर्ग II और III कोशिकाएं हैं जो एक दूसरे से रूपात्मक रूप से अप्रभेद्य हैं। क्रोनिक ल्यूकेमिया के समूह में क्रोनिक मायलोइड ल्यूकेमिया, क्रोनिक लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया, एरिथ्रेमिया, क्रोनिक मोनोसाइटिक ल्यूकेमिया, मायलोफिब्रोसिस, मायलोमा शामिल हैं।

§ 3. ल्यूकेमिक कोशिकाओं की रूपात्मक और साइटोकेमिकल विशेषताएं

निदान में निर्णायक भूमिका रक्त, अस्थि मज्जा, लिम्फ नोड्स और प्लीहा की रूपात्मक संरचना के प्रयोगशाला अध्ययन से संबंधित है।

प्रयोगशाला में, अस्थि मज्जा के गठित तत्वों की संख्या की गणना की जाती है और इसकी सेलुलर संरचना का अध्ययन रक्त स्मीयर की तरह ही तैयार और दाग वाले स्मीयर में किया जाता है। रक्त की प्रति इकाई मात्रा में ल्यूकोसाइट्स की संख्या से बहुत महत्व जुड़ा हुआ है। ल्यूकेमिया ल्यूकोसाइट्स की सामान्य संख्या और ल्यूकोसाइटोसिस और ल्यूकोपेनिया दोनों के साथ हो सकता है। ल्यूकोसाइट्स की संख्या किसी भी प्रकार के ल्यूकेमिया के लिए एक परिवर्तनशील संकेत है। इसके अलावा, रक्त की प्रति यूनिट मात्रा में ल्यूकोसाइट्स की संख्या रोग के चरण पर निर्भर करती है।

ल्यूकेमिक कोशिकाओं में रूपात्मक की एक विस्तृत श्रृंखला होती है और रासायनिक विशेषताएंउन्हें सामान्य कोशिकाओं से अलग करना। एनाप्लास्टिक कोशिकाओं को नाभिक में वृद्धि और उसमें बड़े मोटे न्यूक्लियोली की उपस्थिति की विशेषता है। न्यूक्लियस वेक्यूलेशन नोट किया जाता है। साइटोप्लाज्म तेजी से बेसोफिलिक होता है, जिसे अक्सर खाली कर दिया जाता है। कुछ युवा ट्यूमर कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म में, ग्रैन्युलैरिटी होती है। सेल एनाप्लासिया की डिग्री क्रोनिक ल्यूकेमिया की तुलना में तीव्र ल्यूकेमिया में बहुत अधिक स्पष्ट है।

ल्यूकेमिया के रूप को निर्धारित करने में, रूपात्मक के साथ, साइटोकेमिकल अनुसंधान निर्णायक महत्व का है। साइटोकेमिकल विधियों के लिए धन्यवाद, ल्यूकेमिक कोशिकाओं के बीच कई अंतरों को प्रकट करना संभव है।

साइटोकेमिकल अध्ययनसेल स्तर पर कोशिकीय संरचनाओं, जैव रासायनिक अध्ययनों का सूक्ष्म रासायनिक विश्लेषण करना संभव बनाता है। कोशिकाओं में, लिपिड, ग्लाइकोजन, म्यूकोपॉलीसेकेराइड की उपस्थिति और कई एंजाइमों की गतिविधि निर्धारित की जाती है: पेरोक्सीडेज, एसिड और क्षारीय फॉस्फेटेस, गैर-विशिष्ट एस्टरेज़।

मायलोसाइट्स से खंडित न्यूट्रोफिल तक न्यूट्रोफिलिक श्रृंखला के सभी तत्वों में बेंज़िडाइन का उपयोग करके पेरोक्साइड का पता लगाया जाता है। पेरोक्सीडेज की उपस्थिति में कोशिकाओं का कोशिका द्रव्य पीला हो जाता है। लसीकावत् कोशिकाओं में पेरोक्सीडेज अनुपस्थित होता है। इस विशेषता का उपयोग मायलोइड और लिम्फोब्लास्टिक ल्यूकेमिया के बीच अंतर करने के लिए किया जाता है।

ग्लाइकोजन सभी कोशिकाओं में अधिक या कम मात्रा में पाया जाता है। यह मुख्य रूप से परिपक्व ग्रैन्यूलोसाइट्स में पाया जाता है। मायलोब्लास्ट्स में, ग्लाइकोजन या तो बिल्कुल भी निहित नहीं होता है, या मैजेंटा के साथ दाग होने पर गुलाबी रंग के सजातीय द्रव्यमान के रूप में प्रस्तुत किया जाता है, जो शिफ अभिकर्मक का हिस्सा है। ग्लाइकोजन लिम्फोसाइटों में लाल कणिकाओं के रूप में पाया जाता है। पुरानी लसीका और तीव्र लिम्फोब्लास्टिक ल्यूकेमिया में इसकी सामग्री बढ़ जाती है।

साइटोप्लाज्म और नाभिक में निहित काले कणिकाओं के रूप में माइलॉयड श्रृंखला की कोशिकाओं में काले सूडान के साथ धुंधला होने से लिपिड का पता लगाया जाता है। लिम्फोइड कोशिकाओं में कुछ लिपिड होते हैं और इसलिए उनका पता नहीं लगाया जाता है।

एसिड फॉस्फेटस युवा प्रीस्टेज न्यूट्रोफिल और मोनोब्लास्ट में सक्रिय है। एंजाइम गतिविधि के स्थानों में, धुंधला होने की विधि के आधार पर, साइटोप्लाज्म का लाल या भूरा धुंधला दिखाई देता है। परिपक्व न्यूट्रोफिल में, एसिड फॉस्फेट अपनी गतिविधि खो देता है। तीव्र मायलोब्लास्टिक और मोनोब्लास्टिक ल्यूकेमिया में इसका नैदानिक ​​महत्व है।

क्षारीय फॉस्फेटस परिपक्व न्यूट्रोफिल में एक विशिष्ट प्रतिक्रिया से पता चला काले या भूरे रंग के कणिकाओं के रूप में पाया जाता है। क्रोनिक मायलोइड ल्यूकेमिया में, ल्यूकेमिक न्यूट्रोफिल में इसकी गतिविधि कम हो जाती है, जो इस बीमारी के निदान के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।

गैर-विशिष्ट एस्टरेज़ व्यावहारिक रूप से रक्त और अस्थि मज्जा की सभी कोशिकाओं में पाया जाता है, लेकिन न्यूट्रोफिलिक श्रृंखला की कोशिकाओं में, इसकी सामग्री लिम्फोइड तत्वों की तुलना में अधिक होती है। मोनोसाइटिक कोशिकाओं में गैर-विशिष्ट एस्टरेज़ की उच्चतम गतिविधि होती है। एक विशेष धुंधला विधि के साथ, मोनोबलास्ट्स का साइटोप्लाज्म बारीक गहरे भूरे रंग के दानों से भर जाता है। प्रतिक्रिया का उपयोग तीव्र मोनोब्लास्टिक ल्यूकेमिया के निदान के लिए किया जाता है।

एसिड म्यूकोपॉलीसेकेराइड मुख्य रूप से अपरिपक्व ग्रैन्युलोसाइट्स की ग्रैन्युलैरिटी में निहित होते हैं। तीव्र प्रोमायलोसाइटिक ल्यूकेमिया में उनका पता लगाना सबसे विशिष्ट है। विशेष धुंधला तरीकों से प्रोमाइलोसाइट्स के साइटोप्लाज्म में बड़े गुलाबी-चेरी के दानों का पता लगाना संभव हो जाता है।

§ 4. तीव्र ल्यूकेमिया में रक्त चित्र

ल्यूकेमिया के सभी रूपों को हेमटोपोइजिस में तेज बदलाव की विशेषता है, अर्थात, पैथोलॉजिकल ट्यूमर ऊतक के साथ सामान्य हेमटोपोइएटिक ऊतक का पूर्ण या लगभग पूर्ण प्रतिस्थापन। ट्यूमर सब्सट्रेट ब्लास्ट कोशिकाएं हैं। ये पैथोलॉजिकल कोशिकाएं परिपक्व होने की क्षमता खो देती हैं। ब्लास्ट के रूप परिधीय रक्त में दिखाई देते हैं: मायलोब्लास्ट्स, लिम्फोब्लास्ट्स, एरिथ्रोब्लास्ट्स, आदि। मॉर्फोलॉजिकल रूप से, ब्लास्ट कोशिकाएं एक दूसरे से बहुत कम भिन्न होती हैं, इसलिए उन्हें अलग करने के लिए साइटोकेमिकल विधियों का उपयोग किया जाता है।

परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा के स्मीयर में, "विस्फोट" (99% तक) प्रबल होते हैं, लेकिन एकल परिपक्व कोशिकाएं (1-5%) भी होती हैं। उनके बीच कोई परिपक्व कोशिकाएं मध्यवर्ती नहीं होती हैं। इस घटना को "ल्यूकेमिक गैपिंग" कहा जाता है और यह केवल तीव्र ल्यूकेमिया की विशेषता है।

बढ़े हुए लिम्फ नोड्स, यकृत और प्लीहा के छिद्र में, एक ही विस्फोट रूप (मेटाप्लासिया) पाए जाते हैं।

तीव्र ल्यूकेमिया अक्सर परिधीय रक्त में ल्यूकोसाइटोसिस के साथ होता है (1 लीटर में 100-10 9 -300-10 9 तक)। हालांकि, यह रोग गंभीर ल्यूकोपेनिया (0.2-10 9 -0.3-10 9 प्रति 1 लीटर रक्त) के साथ हो सकता है। कभी-कभी श्वेत रक्त कोशिकाओं की संख्या सामान्य रह सकती है।

ट्यूमर ऊतक के तेजी से विकास के कारण, हेमटोपोइजिस के एरिथ्रोसाइट और प्लेटलेट स्प्राउट्स बाधित होते हैं। यह गंभीर एनीमिया से प्रकट होता है: हीमोग्लोबिन में कमी (0.3-1 ग्राम / एल तक) और लाल रक्त कोशिकाओं (1 लीटर रक्त में 1-10 12 -1.5-10 12 तक)। समानांतर में, थ्रोम्बोसाइटोपेनिया विकसित होता है। ईएसआर काफी बढ़ जाता है।