5. "תגובה חושית-מוטורית. תגובה מוטורית של מתאגרף להופעת גירוי חיצוני בביצועי המהירות של אגרוף, תפקיד חשוב הוא איך המתאגרף מגיב להופעת גירוי חיצוני (צליל, אות, נורה על הדינמומטר לפני

תגובת עיכוב ההמגלוטינציה

סרול. תגובות המבוססות על עיכוב של אגלוטינציה של אריתרוציטים. החל 2 סוגים של G. t. r: תגובה של עיכוב של Hemagglutination אקטיבי (RTGA) ופסיבי (RTPGA). RTGAמשמש לסרודיאגנוזה של זיהומים ויראליים והקלדה של וירוסים לא ידועים. בגרסה הראשונה מוסיפים 0.25 מ"ל של אבחון ויראלי סטנדרטי לסדרת הדילול הכפול של s-to-b-nogo, הנלקחים בתחילת המחלה ו-10-14 ימים לאחר מכן בנפח של 0.25 מ"ל. לאחר חשיפה של שעה בטמפרטורת החדר, 0.5 מ"ל של תרחיף 1% של אריתרוציטים של עוף מתווסף לכל מבחנה (באר). לאחר 30 - 60 דקות בשתי השורות, נקבעים הדילולים האחרונים של s-to, שבהם מצוין עיכוב (היעדר) של ההמגלוטינציה. במקרה של עלייה בטיטר הנוגדנים פי 4 או יותר, הם נותנים תשובה חיובית, במקרים אחרים - שלילית. לצורך הקלדת וירוס מכינים סדרה של דילולים כפולים של דגימה מסוג סטנדרטי בנפח 0.25 מ"ל, לכל דילול מוסיפים נפח שווה של המחקר. תרחיף ויראלי עם פעילות של 4 יחידות המגלוטינציה. (מינונים), מודגרים בטמפרטורת החדר למשך שעה ומוסיפים 0.5 מ"ל של תרחיף 1% של אריתרוציטים של עוף. הנהלת חשבונות מתבצעת באותו אופן כמו בגרסה הקודמת. הנגיף מזוהה זהה ל-s-ke אם RTGA מגיע לטיטר או 1/2 טיטר של s-ki סטנדרטי. בנוסף לאפשרויות זו ואפשרויות אחרות, 3 פקדים מונחים: s-ki, וירוס, אריתרוציטים. RTPGAבוצע בדרך כלל כדי לזהות חיידקים, פטריות, פרוטוזואלים Ag (haptens) במחקר. חוֹמֶר. זה מאוד רגיש, ספציפי, אבל לוקח זמן להגדיר אותו. RTPGA מתבצע גם ב-2 שלבים. בשלב הראשון, לסדרה של דילולים פי שניים של המחקר. נפח שווה (בדרך כלל 0.25 מ"ל) של s-ki immune סטנדרטי, הנלקח במינון עבודה, מתווסף ל-Ag של החומר. המבחנות נשמרות בתרמוסטט למשך שעתיים. בנוכחות ה-Ag המקביל בחומר מתבצעת התקשרות Ab ובהמשך תוספת של אריתרוציטים דיאגנוסטיקום במספר מבחנות (ובהתאם לכמות Ag), אגלוטינציה של אריתרוציטים רגישים מעוכבת. הניסיון מלווה בבקרות עם-ki, אריתרוציטים וחומר.

(מקור: מילון מונחים של מיקרוביולוגיה)

ראה מהי "תגובת עיכוב המוגלוטינציה" במילונים אחרים:

תגובה לעיכוב המגלוטינציה- מעבדת RTGA, שיטה סרולוגית. [מילון מונחים אנגלי-רוסי למונחים בסיסיים בנושא חיסונים וחיסונים. ארגון הבריאות העולמי, 2009] נושאים חיסונים, חיסון מילים נרדפות RTGA EN עיכוב המגלוטינציה… … מדריך מתרגם טכני

- (RTGA) שיטה לזיהוי וירוס או גילוי נוגדנים אנטי-ויראליים בסרום הדם של החולה, המבוססת על תופעת היעדר אגלוטינציה של אריתרוציטים על ידי תרופה המכילה וירוס בנוכחות סרום דם חסין מפניו... מילון רפואי גדול

RTGA

RTG- תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה מילון קיצורים של השפה הרוסית

- (זיהום לטינית מאוחרת) קבוצה של מחלות הנגרמות על ידי פתוגנים ספציפיים, המאופיינת במידבקות, מהלך מחזורי והיווצרות חסינות פוסט-זיהומית. התנאי " מחלות מדבקות"הוצג ... ... אנציקלופדיה רפואית

עמוד זה הוא מילון מונחים. # א ... ויקיפדיה

הקיצורים העיקריים המקובלים במילון האנציקלופדי הווטרינרי- a., aa, artena, arteriae aa ana (באופן שווה) האקדמיה למדעי הרפואה ברית המועצות האקדמיה למדעי הרפואה ברית המועצות האקדמיה למדעים ברית המועצות האקדמיה למדעים Bac. חיידקי הבצילוס. חיידק BSSR ביילורוס SSR c., c. מאה, מאה ו', v. vena, venae VASKHNIL מסדר כל האיחוד של לנין ו ... ... מילון אנציקלופדי וטרינרי

Ag antigen AE יחידה אנטי-טוקסית או אנטי-בקטריאלית. אנטיבקטריאלי At antibody ATP adenosine triphosphoric acid bacter. בקטריוסקופ בקטריולוגי בקטריולוגי בקטריולוגי. פעילות חיידקית ALS בקטריוסקופית ... ... מילון מיקרוביולוגיה

- (מ-lat. serum serum and ... Logia) ממש תורת התכונות של סרום הדם; בדרך כלל תחת S. להבין את ענף האימונולוגיה החוקר אינטראקציה של נוגדנים (ראה. נוגדנים) של סרום עם אנטיגנים (ראה. אנטיגנים). תגובות סרולוגיות ...... האנציקלופדיה הסובייטית הגדולה

לנגיפים רבים יש את היכולת לצבור אריתרוציטים של מינים מוגדרים בהחלט של יונקים וציפורים. לפיכך, נגיפי שפעת וחזרת מציצים אריתרוציטים של תרנגולות, חזירי ניסיונות ובני אדם, ואדנו-וירוס מצמידים אריתרוציטים של חולדות ועכברים. בהקשר זה, לצורך איתורם בחומר של חולים או תרביות תאים, עוברים ובעלי חיים, הם שמים תגובת המגלוטינציה(RGA). לשם כך, בבארות הטבליות מכינים דילולים בעלי גידול כפול של חומרים ונוזלים המכילים וירוסים, ומוסיפים להם השעיות של אריתרוציטים שטופים בתמיסה איזוטונית של NaCl. כדי לשלוט באגלוטינציה ספונטנית, אריתרוציטים מעורבבים עם נפח שווה של תמיסת NaCl איזוטונית. התערובות מודגרות בתרמוסטט בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס או בטמפרטורת החדר.

התוצאות של RHA נלקחות בחשבון על ידי אופי הצבירה של אריתרוציטים לאחר 30-60 דקות, כאשר הם בדרך כלל משוקעים לחלוטין בבקרה. תגובה חיובית מסומנת על ידי פלוסים. "++++" הוא משקע בצורת מטרייה, "+++" הוא משקע עם מרווחים, "++" הוא משקע עם מרווחים גדולים, "+" הוא משקע פלפלי מוקף באזור של אריתרוציטים מקובצים, ו-"–" - אותו משקע אריתרוציטים מוגדר בחדות בצורת "כפתור" כמו בביקורת

בהיותו ספציפי לקבוצה, RGA אינו מאפשר לקבוע את מיני הנגיפים. הם מזוהים עם תגובות עיכוב המגלוטינציה(RTGA). להגדרתו, נעשה שימוש בסרה אנטי-ויראלית חיסונית ידועה, המדוללים בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית בריכוז פוחת פי שניים ושופכים לבארות. כמות שווה של נוזל המכיל וירוס מתווספת לכל דילול. הבקרה היא השעיה של הנגיף בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית. צלחות עם תערובת של סרה ווירוס נשמרות בתרמוסטט למשך 30 דקות או בטמפרטורת החדר למשך שעתיים, ואז מתווספת השעיה של אריתרוציטים לכל אחד מהם. לאחר 30 דקות נקבע הטיטר של הסרום המנטרל (כלומר, הדילול המקסימלי שלו), מה שגרם לעיכוב באגלוטינציה של אריתרוציטים.

RTGA משמש באבחון סרולוגי של מחלות ויראליות, בפרט שפעת ו זיהומי אדנוווירוס. עדיף לשים אותו באותו אופן כמו ה-pH, עם סרה מזווגת. עלייה של פי ארבע בטיטר הנוגדנים בסרום השני מאשרת את האבחנה החשודה.

5 תגובה לנטרול וירוסים. תגובה זו משמשת לזיהוי וירוסים. לשם כך, מוסיפים לחומר הבדיקה סרום אנטי-ויראלי ספציפי המכיל וירוס לא ידוע. לאחר הדגירה, תערובת זו מוזרקת לעובר אפרוח, או לחיית מעבדה, או לתרבית תאים. התגובה השכיחה ביותר היא נטרול של וירוסים בתרבית תאים. כאן, מתווסף אינדיקטור למצע התרבות. אם הנוגדנים תואמים את הנגיף (מנטרלים אותו), אז תרבית התא מתפתחת כרגיל. במקרה זה, מוצרים חומציים של מטבוליזם תאי משתחררים, ה-pH של המדיום יורד, והאינדיקטור משנה את צבעו. בבקרה, הנגיף הורס במהירות את תרבית התאים, ה-pH אינו משתנה וצבע המדיום נשאר זהה.

בדיקת עיכוב ההמגלוטינציה (HITA) היא שיטה לזיהוי נגיף או גילוי נוגדנים אנטי-ויראליים בסרום הדם של החולה, המבוססת על תופעת היעדר צפיפות אריתרוציטים על ידי תרופה המכילה וירוס בנוכחות סרום דם חסין מפניו.

תגובת עיכוב ההמגלוטינציה (RTHA) מבוססת על חסימה, דיכוי אנטיגנים של וירוסים על ידי נוגדנים של הסרום החיסוני, וכתוצאה מכך הנגיפים מאבדים את יכולתם לצבור תאי דם אדומים.

RTHA משמש לאבחון מחלות ויראליות רבות, שגורמיהן (שפעת, חצבת, אדמת, דלקת מוח בקרציות וכו') עלולים לצבור את אריתרוציטים של בעלי חיים שונים.

מַנגָנוֹן. הקלדת הנגיפים מתבצעת במבחן עיכוב ההמגלוטינציה (HITA) עם קבוצה של סמים ספציפיים לסוג. תוצאות התגובה נלקחות בחשבון על ידי היעדר hemagglutination.

ניתן להבדיל תת-סוגים של וירוס A עם אנטיגנים H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 וכו' ב-RTGA עם קבוצה של סמים הומולוגיים ספציפיים לסוג.

תגובה מחייבת משלים. מַנגָנוֹן. רכיבים. יישום

תגובת קיבוע משלים (RCC) מורכבת מהעובדה שכאשר אנטיגנים ונוגדנים תואמים זה לזה, הם יוצרים קומפלקס חיסוני, שאליו מחובר המשלים (C) דרך שבר Fc של הנוגדנים, כלומר, המשלים נקשר על ידי האנטיגן -תסביך נוגדנים. אם לא נוצר קומפלקס האנטיגן-נוגדנים, המשלים נשאר חופשי.

האינטראקציה הספציפית של AG ו-AT מלווה בספיחה (קשירה) של המשלים. מאחר שתהליך קיבוע המשלים אינו מופיע מבחינה ויזואלית, J. Bordet ו-O. Zhangu הציעו להשתמש במערכת ההמוליטית (אריתרוציטים של כבשים + סרום המוליטי) כאינדיקטור, המראה האם המשלים מקובע על ידי קומפלקס AG-AT. אם AG ו-AT תואמים זה לזה, כלומר נוצר קומפלקס חיסוני, אזי המשלים נקשר לקומפלקס הזה והמוליזה לא מתרחשת. אם AT אינו מתאים ל-AG, אז הקומפלקס לא נוצר והמשלים, שנותר חופשי, מתחבר למערכת השנייה וגורם להמוליזה.

רכיבים. מבחן קיבוע משלים (RCC) הוא בדיקה סרולוגית מורכבת. לצורך יישומו, דרושים 5 מרכיבים, כלומר: AG, AT ומשלים (המערכת הראשונה), אריתרוציטים של כבשים וסרום המוליטי (המערכת השנייה).

האנטיגן ל-CSC יכול להיות תרביות של מיקרואורגניזמים מומתים שונים, הליסאטים שלהם, מרכיבי חיידקים, איברים שהשתנו פתולוגית ותקינה, שומני רקמה, וירוסים וחומרים המכילים וירוסים.

כהשלמה, נעשה שימוש בסרום חזיר ניסיונות טרי או יבש.

מַנגָנוֹן. RSK מתבצע בשני שלבים: שלב 1 - דגירה של תערובת המכילה שלושה מרכיבים של האנטיגן + נוגדן + משלים; שלב שני (אינדיקטור) - זיהוי של משלים חופשי בתערובת על ידי הוספת מערכת המוליטית, המורכבת מאריתרוציטים של כבשים, וסרום המוליטי המכיל נוגדנים אליהם. בשלב הראשון של התגובה, במהלך היווצרות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, מתרחשת קישור משלים, ולאחר מכן בשלב השני, המוליזה של אריתרוציטים הרגישים על ידי נוגדנים לא תתרחש; התגובה חיובית. אם האנטיגן והנוגדן אינם מתאימים זה לזה (אין אנטיגן או נוגדן בדגימת הבדיקה), המשלים נשאר חופשי ובשלב 2 הוא יצטרף לקומפלקס הנוגדנים אריתרוציטים-אנטי-אריתרוציטים, ויגרום להמוליזה; התגובה שלילית.

יישום. RSK משמש לאבחון מחלות זיהומיות רבות, בפרט עגבת (תגובת ווסרמן).

HEMAGLUTINATION(מיוונית, חימה דם + lat. agglutinatio gluing) - תופעת הדבקת אריתרוציטים. ההמגלוטינציה יכולה להיות ישירה, כלומר להתרחש עקב ההשפעה הישירה של חומרים מסוימים על אריתרוציטים, ועקיפה (פאסיבית), כאשר אריתרוציטים המטופלים באנטיגן (או נוגדנים) נצברים, בהתאמה, על ידי סרום חיסון (או אנטיגן).

המגלוטינציה ישירה יכולה להיגרם על ידי סרום אנטי אריתרוציטים, תמציות מרקמות רוק, נסיוב אנושי ובעלי חיים, כמו גם חיידקים מסוימים (סטפילוקוקוס, coli, חיידקי טיפוס, פארטיפוס, דיזנטריה) ונגיפים רבים. צבירה של אריתרוציטים על ידי סרה רגילה מתחלקת לאיזו-המוגלוטינציה, אם הסרום והאריתרוציטים שייכים לפרטים מאותו המין, והטרואגלוטינציה, כאשר אריתרוציטים זרים נצמדים זה לזה.

סרום יכול לרכוש את היכולת ל-G. במחלות מסוימות. כך, למשל, הסרום של החולים מחלת הנשיקה מדבקתמצמיד אריתרוציטים של כבשים (ראה תגובת פול-בונל).

ל-G. הנגרם על ידי וירוסים חשיבות תיאורטית ומעשית רבה. הוא תואר לראשונה בשנת 1941 על ידי G. K. Hirst, McClelland and Hare (L. Mac Clelland, R. Hare). הם גילו שנגיף השפעת מצמיד אריתרוציטים של עוף, שעל בסיסו פותחה בדיקת ההמגלוטינציה (RHA). לאחר מכן, נמצאו תכונות המגלוטינציה בווירוסים רבים. המדספציה קשורה גם לתופעה של G., כלומר, היכולת של תאים הנגועים בנגיפים המגלוטינרים מסוימים לספוח אריתרוציטים על פני השטח שלהם (ראה Hemadsorption). יכולתם של וירוסים לגרום ל-G. מדוכאת על ידי הסרה האנטי-ויראלית המקבילה, המשמשת בתגובה של עיכוב (החזר) של ההמגלוטינציה (RTGA).

RGA ו-RTGA נמצאים בשימוש נרחב הן במחקרים תיאורטיים בתחום הוירולוגיה והן באבחון זיהומים ויראליים לצורך אינדיקציה, זיהוי וסיווג של וירוסים, וכן לאיתור נוגדנים אנטי-ויראליים (אנטי-המגלוטינינים) בסרום הדם של חולים. . לפיכך, בבידוד של וירוסי שפעת וחזרת, האינדיקטור הוא צבירה של אריתרוציטים של עוף על ידי מי השפיר והאלנטואי של עוברי עוף נגועים.

למטרות זיהוי, נעשה שימוש ביכולת הסלקטיבית של כמה וירוסים לצבור סוג מסוים של תאי דם אדומים. נגיף החצבת, למשל, מצמיד רק אריתרוציטים של קופים, בעוד נגיף האנצפלומיוקרדיטיס של העכבר מצמיד אריתרוציטים של כבשים.

ברוב הנגיפים, ההמגלוטינין (המצע האחראי על G.) הוא מרכיב מבני של הנגיף.

בווירוסים, שהקפסיד שלו לבוש במעטפת ליפופרוטאין חיצונית (נגיפי שפעת, פאראאינפלואנזה, רוב נגיפי הארבו), ההמגלוטינין ממוקם בקליפה זו ומזוהה מבנית עם מה שנקרא. villi. לפי chem. הטבע ההמגלוטינינים של וירוסים אלה הם גליקו- או ליפופרוטאינים. לפיכך, ההמגלוטינין של וירוס השפעת הוא טטרמר המורכב משני זוגות של גליקופרוטאינים עם סך מול. במשקל 150,000. לגליקופרוטאין המגלוטינציה של הקליפה של ארבו-וירוס מקבוצה B יש מול. משקל 50,000.

בנגיפים שאין להם מעטפת חיצונית, ההמגלוטינין קשור למבני קפסיד. לפיכך, באדנו-וירוסים, לסיבים היוצאים מקפסומרים אפיקליים יש פעילות המגלוטינציה.

ההמגלוטינין של נגיפי אבעבועות שחורות הוא ליפופרוטאין והוא אחד מתוצרי רבייתם, אך, ככל הנראה, אינו כלול בהרכב הנגיף, מכיוון שחלקיקים נגיפיים מטוהרים אינם גורמים ל-G.

G. יכול לגרום הן לחלקיקים ויראליים מדבקים והן לחלקיקים מומתים, כך שהטיטר המגלוטי של הנגיף אינו משקף את פעילותו המדבקת. במקרים מסוימים, ההמגלוטינין יכול להיות מופרד מהחלקיק הנגיפי (למשל, באדנוווירוסים). נגיפים מסוימים (שפעת, חצבת, ECHO) יכולים, במהלך רבייתם, ליצור נגיפים ריקים, נטולי RNA, שיש להם גם פעילות המגלוטינציה.

המנגנון של ג' נחקר על ידי hl. arr. בניסויים בנגיף השפעת. האינטראקציה שלו עם אריתרוציטים עוברת שני שלבים - ספיחה ואלוציה לאחר מכן (ראה). השלב הראשון של ספיחה של וירוסים על אריתרוציטים הוא פיזי. תהליך ונקבע על ידי הפרש המטען והמשיכה הבין מולקולרית (כוחות ואן דר ואלס). השלב השני הוא כימיה. אינטראקציה של הנגיף עם קולטני אריתרוציטים.

המנגנון של תהליך הצבירה של אריתרוציטים עצמו אינו ברור לחלוטין. יתכן וחשוב לשנות את המטען האלקטרוסטטי של אריתרוציטים לאחר ספיחה של וירוסים עליהם.

ייתכן גם שחלקיקים ויראליים יוצרים "גשרים" בין אריתרוציטים בודדים.

החיבור של נגיף השפעת וכמה פרמיקו-וירוסים עם פני השטח של אריתרוציטים הוא הקולטנים של האחרונים, שהם הדו-סוכר 6-(N-אצטיל-נוירמיניל) אלפא-D-N-אצטיל-גלקטוסאמין. תחת פעולת האנזים הנגיפי neuraminidase, קולטני אריתרוציטים מתפצלים ל-N-acetylgalactosamine וחומצה N-acetylneuraminic.

ב t ° 37 °, לאחר מספר שעות, נגיף השפעת נפלט מאריתרוציטים. בתמיסה ההיפרטונית של נתרן כלוריד, תהליך זה ממשיך (מהיר יותר. עקב הרס של קולטנים, אריתרוציטים מאבדים את יכולתם להצטבר שוב עם אותו וירוס, למרות שהם יכולים להיצמד יחד בהשפעת מספר וירוסים אחרים.

קולטנים לגליקופרוטאינים של אריתרוציטים יכולים גם להיהרס על ידי פריודאט, טריפסין ותסנין של ויבריו כולרה המכילים נוירמינידאז.

רוב הנגיפים האחרים (אבעבועות, ארבו-וירוסים וכו') אינם הורסים קולטנים של אריתרוציטים. הפליטה שלהם אינה מתרחשת באופן ספונטני, אלא בהשפעת הסרום החיסוני, שינויים בהרכב האלקטרוליטים של המדיום, ה-pH שלו וכו'.

ג' תלוי במאפיינים של הנגיף והאריתרוציטים גם יחד (טבלה).

וירוסים שיכולים לגרום לאגלוטינציה של אריתרוציטים בכמה חוליות

פעילות ההמגלוטינציה שונה הן בקרב חברי אותה קבוצת סיווג, והן בזנים שונים של אותו נגיף, ואף בשיבוטים בודדים של אותו זן. למשל, הבחנות בין זנים מתבטאות ב- enteroviruses של כמה סרוטיפים. באוכלוסיית נגיף Coxsackie A-21, נמצאו גם חלקיקי המגלוטינציה וגם אלה חסרי תכונה זו.

כדי להשיג G. גלוי, התרחיף הנגיפי חייב להכיל לפחות 105-106 חלקיקים ויראליים לכל 1 מ"ל.

ניתן להגביר את פעילות ההמגלוטינציה של נגיפים מסוימים (למשל, חצבת, חזרת, אדמת) על ידי טיפול בתרחיף הנגיף עם tween-80 ואתר, כנראה עקב התפוררות המעטפת החיצונית של הנגיף.

ג' תלוי גם בסביבה לטיפוח הנגיף ובנוכחות של מעכבים החוסמים תהליך זה.

לדוגמה, כאשר מטפחים את נגיף Coxsackie A-21 בתאים מושתלים ממקור ממאיר, נוצרים רק חלקיקים שאינם מדמיגים. Ch. הוא מקור לקבלת אנטיגנים המאגלוטינים של ארבו-וירוסים. arr. המוח של עכברים יונקים נגועים המכילים מעכבים רבים של G. לכן, להכנת אנטיגנים אלה, נעשה שימוש במיצוי רקמת המוח בתמיסת מלח בוראט עם pH 9.0, טיהור עם פריאון ומשקעים עם אצטון.

ניתן להשיג ביטול חסימת ההמגלוטינין ביעילות רבה גם על ידי טיפול נוסף בתרחיף עם tween-80 ואתר, אולטרסאונד וטריפסין בריכוזים נמוכים.

בווירוסים מסוימים היכולת לגרום ל-G. תלויה במספר המעברים במצע זה או אחר. כאן, התאמת הנגיף לתנאי הגידול והעלייה בפעילות רבייתו לרמה שבה ריכוז חלקיקי הנגיף הופך מספיק להופעת G. לפעמים נצפה קשר הפוך: עם מספר המעברים , פעילות ההמגלוטינציה של הנגיף יורדת עד שהוא נעלם לחלוטין. יתכן שתופעות אלו מבוססות על בחירה (במהלך מעברים) של חלקיקים המגלוטינים או שאינם מדמיגים.

מבין הגורמים המאפיינים אריתרוציטים, יש חשיבות מיוחדת לשיוך המינים שלהם.

היכולת של אריתרוציטים להצטבר על ידי וירוס מסוים מבוססת באופן אמפירי. בדרך כלל, וירוסים השייכים לאותה קבוצת סיווג מצמידים את אותם סוגים של תאי דם אדומים. יחד עם זאת, חשובים גם המאפיינים האישיים של התורם.

ג' משפיע גם על גיל ומינו של התורם. לדוגמה, נגיף ה-vaccinia פעיל יותר בהצטברות אריתרוציטים של תרנגולות בוגרות מאשר בתרנגולות.

עבור עבודה עם arboviruses, אריתרוציטים של ציפורים צעירות עדיפים. בנוסף, מומלץ להשתמש ב-Gander RBCs ולא RBCs של אווז, שכן שינויים הורמונליים במהלך הטלה ודגירה של ביצים משנים את תכונות פני השטח של RBCs, וכתוצאה מכך הם עלולים להיות עמידים בפני פעולת הנגיף או נוטים באופן ספונטני. להצטבר.

אריתרוציטים של כמה מינים של בעלי חיים (ארנבות, חולדות, עכברים) נותנים לעתים קרובות אצגירה ספונטנית, אשר יש לקחת בחשבון כאשר מפתחים מצבים סטנדרטיים של G. עם כל וירוס. אריתרוציטים של עופות מועדפים על פני אריתרוציטים של יונקים מכיוון שהם שוקעים במהירות, נותנים תמונה ברורה ופחות רגישים לאגלוטינציה ספונטנית. כאשר מדגים RHA עם וירוסים מסוימים, למשל, נגיף השפעת, ניתן להשתמש בשני אריתרוציטים טריים וכאלה שנשמרו עם 25% פורמלין.

G. תלוי בהרכב האלקטרוליטים של המדיום, בריכוז יוני המימן ובטמפרטורה. בסביבה ללא אלקטרוליטים, אגלוטינציה של אריתרוציטים על ידי וירוסים אינה מתרחשת.

יש הרכב אלקטרוליט אופטימלי מסוים של המדיום; לדוגמה, ספיחה של ההמגלוטינינים של וירוס vaccinia על אריתרוציטים של עוף היא מקסימלית ב-0.45-1.8% נתרן כלורי.

הצהרה RHA מתבצעת ב t ° 4; 20-25 או 37 מעלות. נגיף השפעת, למשל, מצמיד אריתרוציטים בצורה הטובה ביותר ב- t° 4°, וירוס vaccinia ב- t° 37°, ולנגיפי G. arbovirus, הטמפרטורה לא משנה.

גם הדרישות של וירוסים שונים לריכוז יוני מימן אינן זהות. רובם גורמים ל-G. ב-pH 6.0-8.5. לכן, תמיסה איזוטונית של נתרן כלוריד משמשת לרוב כחומר בינוני, לפעמים מוסיפים ל-Krom חיץ פוספט 0.014M עם pH 7.2 (עבור G. עם נגיפי שפעת, חצבת, חיסון וכו').

ארבו-וירוסים, שהיכולת שלהם ל-G. חלשה מאוד, דורשים ריכוז מוגדר בהחלט של יוני מימן: הסטייה מה-pH, האופטימלית לכל וירוס, מותרת ב-0.3-0.4 יחידות לכל היותר.

מאז ההמגלוטינינים של וירוסים אלה יציבים רק ב סביבה אלקלית(ב-pH 9.0), והאזור עם pH של 5.6-7.0 אופטימלי עבור RGA, נוצר הריכוז הדרוש של יוני מימן בזמן החיבור של האנטיגן לאריתרוציטים, הוספת אריתרוציטים בתמיסת חיץ חומצית לתרחיף הבסיסי של הנגיף.

ההרכב של תמיסות חיץ יכול להשפיע על ספקטרום המינים של רגישות אריתרוציטים. אם, למשל, נגיף האדמת מצמיד אריתרוציטים של תרנגולות, יונים ואווזים במדיום בהרכב רגיל, אז כאשר משתמשים ב-0.025 M HEPES-buffer (N-2-hydroxyethylpiperazine - N12-ethanesulfouic acid) pH 6.2 בתוספת של 0.4 M NaCl, 0.001 M CaCl2, 1% אלבומין בסרום בקר ו-0.00025% ג'לטין, הוא גם מצמיד אריתרוציטים של תרנגולות בוגרות, בני אדם (דם קבוצה 0), קופים, כבשים, חזירים, חתולים, ארנבות, חולדות, אוגרים ועכברים.

כדי לאשר את הספציפיות של G. ויראלי, כמו גם לזהות אנטי-המגלוטינינים נגיפיים בסרום עם סרול, המחקר הוא RTGA. הספציפיות שלו אינה זהה עבור קבוצות שונות של וירוסים. עבור arboviruses מהסוג אלפא ו-flaviviruses, RTGA הוא ספציפי לקבוצה, כלומר, הוא חושף קשרים אנטיגנים בין חברי קבוצה זו. זה מסבך הערכת תוצאות סרול, חוקר את קיומם בכל מחוז של מספר וירוסים מקבוצה אחת. בנגיפים אדנו וריאו, מתגלים תכונות ספציפיות לסוג בעזרת RTGA, ואפילו הבדלים עדינים בין זנים מאותו המין נלכדים בנגיפי שפעת.

עבור RTGA רצוי להשתמש באנטיגנים פעילים ביותר. אנטיגנים בעלי פעילות נמוכה מכילים לרוב חלקיקים ויראליים רבים שאינם מדמיגים שיכולים להיקשר לנוגדנים ולמנוע את זיהוים. כאשר משתמשים בתרביות תאים נגועים כמקור להמגלוטינין, הסרום אינו נכלל בהרכב המדיום או מעכבי G מוסרים ממנו קודם לכן.

חסימת מעכבי נסיוב של G. עליו. ההרכב הוא בעיקר בטא-ליפופרוטאין, וגודל המולקולות קרוב ל-198 נוגדנים. סרום שנבדק ב-RTHA משוחרר ממעכבים על ידי חימום ב- t° 56 או 62° למשך 30 דקות, טיפול בתסנין של vibrio cholerae או neuraminidase, טריפסין, ספיחה של מעכבים עם קאולין, משקעים של נוגדנים עם אצטון, טיפול במגנזיום כלוריד ו הפרין, טיפול בסולפט דקסטרן וסידן כלורי, טיפול ברינול. היעילות של שיטות בודדות ביחס להסרה של מעכבים שונים אינה זהה. שלוש השיטות הראשונות מספיקות להסרת מעכבי G. הנגרמים על ידי נגיפי שפעת ופראאינפלואנזה. הטיפול בסרה עם קאולין ואציטון משמש כאשר עובדים עם arboviruses, rivanol, וכאשר לומדים זיהומים enterovirus. כאשר מתגלים נוגדנים לנגיף האדמת, משתמשים בטיפול בקאולין, מגנזיום כלוריד והפרין או דקסטרן סולפט וסידן כלורי.

הסרה שנחקרה ב-RTGA חופשית גם מאגלוטינינים מסוג אריתרוציטים המשמשים בניסוח התגובה. זה נעשה על ידי ספיחה של אגלוטינינים על ידי השעיה מרוכזת של אריתרוציטים אלה.

טכניקת הגדרת RGA ו-RTGA

התגובות ממוקמות במבחנות או על צלחות זכוכית אורגניות עם שקעים. שיטת המיקרו באמצעות מיקרוטיטר Takachi, שהוא סט של צלחות קטנות עם שקעים בצורת U, סט של טפטפות ומדללים, נמצא בשימוש נרחב. נפח תערובת התגובה בשיטת המאקרו הוא 0.8 מ"ל, ובשיטת המיקרו הוא 0.1 מ"ל. תאי דם אדומים משמשים בריכוז של 0.25 עד 1%". להגדרת RHA, 0.2 (0.025) מ"ל של אנטיגן, 0.2 (0.025) מ"ל של תמיסת מלחו-0.4 (0.05) מ"ל של תרחיף אריתרוציטים. ב-RTGA נשמרים אותם יחסי מרכיבים, אך במקום תמיסת המלח מוסיפים את הסרום הנבדק. ב-RHA קבעו את טיטר ההמגלוטינין, כלומר הדילול הגדול ביותר, שנותן G ברור. כמות ההמגלוטינין הכלול ב-0.2 מ"ל של דילול זה תהיה יחידה אחת המגלוטינציה (HE). לטיטרציה של סרה ב-RTHA, בהתאם למאפייני הנגיף, נעשה שימוש ב-4-8 יחידות אגלוטינציה (AU).

תוצאות התגובה, כלומר. נוכחות או היעדרו של G., מוערכת לפי אופי משקע האריתרוציטים (איור). אריתרוציטים צמודים מתיישבים בצורה של סרט, לפעמים עם קצוות משוננים, המזכירים מטרייה הפוכה. בהיעדר אגלוטינציה, אריתרוציטים מצטברים במרכז השקע בצורת דיסק קומפקטי. הזמן הנדרש לשקיעת אריתרוציטים נע בין 45 דקות. עד השעה 2. בהתאם למין האריתרוציטים, נפח תערובת התגובה והטמפרטורה. אריתרוציטים "כבדים", בעלי גרעין, של ציפורים מתיישבים מהר יותר. G. מתרחש מהר יותר בטמפרטורה גבוהה יותר מאשר בטמפרטורה נמוכה יותר.

לתגובה של המאגלוטינציה עקיפה (פאסיבית) (RNHA או RPHA) יש שני זנים עיקריים: א) צבירה של אריתרוציטים הרגישים על ידי אנטיגן, סרום חיסון; ב) צבירה של אריתרוציטים הרגישים על ידי נוגדנים בנוכחות אנטיגן. ישנם שני שלבים של התגובה. במהלך הראשון, חל שינוי בתכונות פני השטח של אריתרוציטים כתוצאה מספיחת אנטיגנים (או נוגדנים) עליהם. בשלב השני, נוגדנים (או אנטיגנים) נספגים על אריתרוציטים רגישים ונוצרים קונגלומרטים.

למטרות אבחון עם אנטיגנים חיידקיים, נעשה שימוש ב-RNHA על ידי A.T. Kravchenko ו-M.I. Sokolov בשנת 1946. בסביבה בסיסית, אנטיגן פוליסכרידי הופץ מתאי חיידקים, נספג על אריתרוציטים אנושיים מקבוצה 0, ושולב מיד עם סרום אבחנתי. השיטה אינה דורשת הקצאה של תרביות טהורות של חיידקים שכן ספיחה של אנטיגן יכולה להתבצע ישירות מפטול, חומר. באמצעות טכניקה זו, ניתן היה לזהות כמות כזו של אנטיגן ב-1 מ"ל של תמיסת מלח, התואמת ל-50-100 מיליון גופים מיקרוביאליים, שנקבעו על פי התקן האופטי.

RNHA על פי קרבצ'נקו וסוקולוב והשינויים שלו שימשו בבקטריולוגיה, אבל היכולות שלו הוגבלו על ידי העובדה שרק אנטיגנים פוליסכרידים, ולא חלבונים, יכולים להיספג על אריתרוציטים מקומיים. אבל בשנת 1951, בוידן (S.V. Boyden) הראה שאריתרוציטים שנחרטו בחומצת טאנין רוכשים את היכולת לספוח חלבונים על פני השטח שלהם (ראה תגובת בוידן).

בשנת 1956 שינה Rycay (T. Rycaj) את הטכניקה של בוידן: אריתרוציטים עוברים רגישות עם נוגדנים ומשמשים לזיהוי אנטיגנים שונים. עבור ספיחה על אריתרוציטים, אימונוגלובולין של סרה חיסונית משמש. ניתן להשתמש ב-RNHA על פי נייט לא רק לציון אנטיגנים, אלא גם לטיטרציה של סרום, תוך שימוש בתופעת כיבוי, או עיכוב, RNHA. במקרה זה, הסרום הנחקר בדילול מתאים משולב עם אנטיגן, שכנגדו אמורים להתגלות נוגדנים, ולאחר מכן מוסיפים אריתרוציטים רגישים. בנוכחות נוגדנים, האנטיגן נקשר אליהם ולא מתרחשת אגלוטינציה. בחקר הסרה, הן לפי השיטה המקורית של בוידן, והן לפי נייט, יש להסיר תחילה מעכבים והטרוהמגלוטינינים מהנסיוב.

המנגנון של RNGA אינו מובן היטב; בהקשר זה, בבחירת התנאים לרגישות של אריתרוציטים עם אנטיגנים ונוגדנים שונים, כמו גם בבחירת סוג אריתרוציטים, משתמשים בעיקר בגישה אמפירית.

פעילות הספיחה של אריתרוציטים מקומיים נמוכה, אך ניתן להגביר אותה על ידי טיפול באריתרוציטים עם טאנין, אקרוליין, גלוטאראלדהיד ותרכובות בי-דיאזוטיות (מצבר המאגלוטינציה).

כדי ליצור תרופות יציבות, מפתחים שיטות כימיות. התקשרות של אנטיגן או נוגדנים לאריתרוציטים, במיוחד על ידי יצירת קשרי דיאזו. למטרה זו, למשל, נעשה שימוש בבנזידין דיאזוטי, טולולן-2,4-דיאיזוציאנאט, קרבודימיד מסיס במים, דיפלואורדיניטרובנזן. מתואר השימוש ב-4,4-bis-diphenyldiazonium borofluoride עבור הצמדת נוגדנים polycondensed ל-Ram אריתרוציטים כדי להצביע על פתוגנים של rickettsiosis.

RNGA נמצא בשימוש נרחב בבקטריולוגיה. עם מגיפה, כולרה, ברוצלוזיס וטולרמיה, משתמשים בשני סוגי התגובה, עם קדחת ארגמן, דיפטריה ודיזנטריה, רק הגרסה האנטיגני, אריתרוציטים שעברו רגישות נוגדנים משמשים לזיהוי רעלן בוטולינום.

בווירוסול. מחקרים, RNHA בוצע לראשונה עם חזרת ונגיפי מחלת ניוקאסל בשנים 1946-1948, ולאחר מכן, לאחר הפסקה של כמעט עשר שנים, היו דיווחים על רבייה של תגובה זו עם אדנו-וירוסים, נגיף הרפס, מיקסוירוס, וירוס חיסון, וירוס ארבו, ציטומגלווירוס , וירוס מחלת הפה והטלפיים, לוקמיה של עוף ועוד. תנאי התגובה האופטימליים עבור וירוסים שונים נבחרים בנפרד.

כדי לזהות את נגיף האנצפליטיס בקרציות, מתוארת תגובה בשינוי האביר. אריתרוציטים רגישים עם אימונוגלובולין מסרום של סוס חסין בפני דלקת מוח קרציות, משמש להצביע על נגיפי דלקת מוח וסקוטית בתרבית BNK-21. לשם כך, הנוזל המכיל וירוס מדולל בתמיסה של 1% של סרום סוס רגיל בפקטור של 2. 1-2 טיפות של אריתרוציטים רגישים מתווספות ל-0.5 מ"ל של האנטיגן של כל דילול. התגובה נלקחת בחשבון לאחר 1-2 שעות. ניתן להשתמש ב-RNGA לאיתור נגיף ה-vaccinia והאבעבועות השחורות הן בתרביות מעבדה והן בפטול, חומר מחולים (דטריטוס וקרום).

בִּיבּלִיוֹגְרָפִיָה: Gaidamovich S. Ya and Casale J. מחקר השוואתי של אנטיגנים arbovirus hemagglutinating שהוכנו מתרביות רקמה וממוח של עכברים, Vopr, virusol., No. 2, p. 238, 1968; Levi M. I. and Basova H. N. Erythrocyte diagnosticums ושימושם בסרולוגיה, Probl. זיהומים מסוכנים במיוחד, ג. 2, עמ'. 207, סרטוב, 1970; Noskov F. S. et al. יישום התגובה של hemagglutination עקיף עבור אבחון מעבדהאבעבועות שחורות טבעיות, Vopr, virusol., No. 3, p. 347, 1972;

Knight T. איתור בוטולינום טוקסין מסוג A במוצרי מזון בשיטת ההמגלוטינציה הספציפית, בול. פולני, אקדמאי מדעים, כרך 4, JsTs 9, p. 341, 1956.

ס' יא גאידמוביץ'.